大家好，关于凝胶成像仪很多朋友都还不太明白，不过没关系，因为今天小编就来为大家分享关于凝胶成像系统的知识点，相信应该可以解决大家的一些困惑和问题，如果碰巧可以解决您的问题，还望关注下本站哦，希望对各位有所帮助！
本文主要内容一览
凝胶成像仪（凝胶成像系统）
1牛肉高温下氨基酸会破坏营养吗
：以牛背最长肌为研究对象，对其进行高温处理（110、115、121 ℃分别加热3、6、9、12、15 min），通过分析蛋白质化学键、傅里叶变换红外光谱、紫外光谱、内源荧光光谱以及蛋白质片段大小等结构信息变化，探讨高温处理对牛肉蛋白质化学作用力及肌原纤维蛋白结构的影响。结果表明，随着处理温度的升高和加热时间的延长，牛肉蛋白中离子键和氢键含量显著下降（P＜0.05），疏水相互作用和二硫键含量显著升高（P＜0.05）。肌原纤维蛋白二级结构发生重排，N—H和C—N伸缩振动以及N—H弯曲振动较为明显。高温处理促使芳香族氨基酸残基暴露于分子表面，并改变了肌原纤维蛋白质疏水区域的局部结构和蛋白质的三级结构。此外，在高温处理下肌原纤维蛋白发生了明显的降解聚集，并形成了大量小分子质量的蛋白片段。可见，高温处理能够显著改变牛肉蛋白质的化学作用力及肌原纤维蛋白的结构，本研究为高温处理下牛肉蛋白质变化机制的研究提供参考。
关键词：高温处理；牛肉蛋白质；化学作用力；肌原纤维蛋白结构
高温肉制品（如酱牛肉等）是指加热介质温度高于100 ℃（通常为115～121 ℃）、中心温度高于115 ℃并恒定适当时间的肉制品，具有营养卫生、食用方便、携带方便等特点，深受消费者喜爱[1]。加热是肉制品加工过程中最重要的工艺之一，而热加工过程中肌肉蛋白质分子间化学作用力和结构的变化对肉制品的最终品质起着重要影响[2]。李蕙蕙[3]研究发现，在鸡肉火腿肠加工过程中，随加热温度的升高，鸡胸肉盐溶蛋白溶液的疏水相互作用先剧烈上升后稳步回落，加热到80 ℃时，盐溶蛋白中210、96.5 kDa及小分子质量蛋白的电泳带全部消失。邓丽等[4]研究了鲍鱼热加工过程中蛋白间作用力及其质构特性，结果发现随温度升高，蛋白二级结构发生明显变化，各化学作用力与蛋白凝胶质构特性具有高度相关性。刘海梅等[5]研究发现，在鲢鱼鱼糜凝胶形成过程中，采用40 ℃和90 ℃两段加热，鲢鱼肌球蛋白的α-螺旋结构部分转变成β-转角和无规卷曲结构，以无规卷曲结构为主，其中α-螺旋和无规卷曲结构是维持鲢鱼鱼糜凝胶网络结构的主要蛋白质构象。张莉莉[6]的研究发现，随着处理温度（100～121 ℃）的升高，鱼糜凝胶中蛋白质二级结构无规卷曲被破坏，离子键和疏水相互作用剧烈下降，而氢键和二硫键整体呈上升的趋势。
国内外对肉制品在热加工过程中蛋白质间化学作用力和结构变化的研究多集中在火腿肠、鱼糜等方面，并且通常在100 ℃以下，而对牛肉高温肉制品的研究较少。本实验以不同高温处理的牛背最长肌为研究对象，采用化学法并结合傅里叶变换红外光谱、紫外光谱、内源荧光光谱以及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis，SDS-PAGE），研究高温处理对蛋白质间化学作用力和结构的影响，以期为进一步分析高温处理过程中牛肉蛋白质变化的机理提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
选取来自河南伊赛牛肉股份有限公司宰杀的18 月龄夏洛莱牛公牛6 头，屠宰前禁食、禁水12 h。每头牛经击晕、宰杀、放血、去头蹄内脏、剥皮、劈半、冲洗后，胴体吊挂排酸3 d，选取牛背最长肌作为样品。
氯化钠、尿素、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、溴化钾、溴酚蓝、异丙醇、乙酸、磷酸（均为分析纯） 天津市德恩化学试剂有限公司；丙烯酰胺、四甲基乙二胺（tetramethylenediamine，TEMED）、N,N’-亚甲基双丙烯酰胺、β-巯基乙醇、SDS 美国Sigma公司。
1.2 仪器与设备
FJ-200高速分散均质机 上海标本模型厂；H1650高速离心机 长沙湘仪离心机仪器有限公司；DYCZ-24DN垂直电泳槽、DYY-6C型稳压稳流型电泳仪北京市六一仪器厂；Gel-Doc-XR+凝胶成像仪 美国Bio-Rad公司；TYAIB型高压蒸汽灭菌锅 宁波久兴医疗器械有限公司；VERTEX70型傅里叶变换红外光谱仪德国Bruker公司；UV2600紫外-可见分光光度计 日本Shimadzu公司；Cary eclipse型荧光分光光度计 美国Aglient公司。
1.3 方法
1.3.1 牛肉样品的预处理及高温处理
生鲜牛背最长肌顺着肉样纹理将其肉眼可见的表面脂肪、夹层脂肪剔除干净，并修整切割成大小均匀的方形肉块（5 cm×5 cm×1 cm），用蒸煮袋真空密封包装，随后放入高压蒸汽灭菌锅中进行高温处理。参考张莉莉[6]的方法，高温处理条件为：高压蒸汽灭菌锅压力0.12 MPa，当温度达到（110±1）、（115±1）℃和（121±1）℃后分别保持3、6、9、12、15 min，高温处理后的牛肉样品静置冷却后放在4 ℃冰箱冷藏室待测。
1.3.2 肌原纤维蛋白的提取
参照Xiong Youling L.等[7]的方法并作适当修改，准确称取5.000 0 g处理过的肉样，以未处理（0 min）的样品为对照，加入10 倍体积分离缓冲液A（0.1 mol/L KCl、2 mmol/L MgCl2、1 mmol/L乙二醇双（2-氨基乙基醚）四乙酸、0.5 mmol/L二硫苏糖醇、10 mmol/L K2HPO4，pH 7.0），10 000 r/min均质1 min后80 目纱布过滤，滤液10 000 r/min冷冻离心10 min，取沉淀，重复3 次。沉淀再加入4 倍体积分离缓冲液B（0.1 mol/L NaCl、1 mmol/L NaN3，pH 6.25），10 000 r/min冷冻离心10 min，弃上清液取沉淀，重复3 次，沉淀即为肌原纤维蛋白。
1.3.3 化学作用力的测定
参考Gómez-Guillén等[8]的方法，准确称取1 g处理后的肉样，以未处理（0 min）的样品为对照，分别加入10 mL 0.05 mol/L NaCl（SA）、0.6 mol/L NaCl（SB）、0.6 mol/L NaCl+1.5 mol/L尿素（SC）、0.6 mol/L NaCl+8 mol/L尿素（SD）、0.6 mol/L NaCl+8 mol/L尿素+1.5 mol/L β-巯基乙醇（SE），10 000 r/min均质1 min后于4 ℃条件下静置2 h，然后10 000 r/min冷冻离心10 min，取上清液。采用Lowry法测定上清液中蛋白质的含量。离子键的含量以溶解于SB与SA的蛋白质含量之差表示；氢键的含量以溶解于SC与SB的蛋白质含量之差表示；疏水相互作用的含量以溶解于SD与SC的蛋白质含量之差表示；二硫键的含量以溶解于SE与SD的蛋白质含量之差表示。离子键的相对含量以离子键的含量与所有化学作用力的含量之和的比来计算，氢键、疏水相互作用、二硫键相对含量的计算方法与之相同。
1.3.4 肌原纤维蛋白傅里叶变换红外光谱分析
准确称取1 mg不同温度处理的肌原纤维蛋白，以未处理（0 min）的样品为对照，加入100 mg KBr研磨压片，采用傅里叶变换红外光谱仪对样品在400～4 000 cm-1范围内进行全波数扫描，仪器分辨率为5 cm-1，扫描信号累加64 次。
1.3.5 肌原纤维蛋白紫外吸收光谱分析
不同温度处理的肌原纤维蛋白用10 mmol/L pH 7的磷酸盐缓冲液配制成1 mg/mL的蛋白溶液，以10 mmol/L pH 7的磷酸盐缓冲液作为空白，以未处理（0 min）的样品为对照，进行紫外光谱扫描，扫描速率10 nm/s，扫描波长范围200～600 nm。
1.3.6 肌原纤维蛋白内源荧光光谱分析
不同高温处理下的肌原纤维蛋白用10 mmol/L pH 7的磷酸盐缓冲液配制成1 mg/mL的蛋白溶液，以10 mmol/L pH 7的磷酸盐缓冲液作为空白，以未处理（0 min）的样品为对照，采用荧光分光光度计进行荧光光谱扫描，激发波长为295 nm，发射波长300～400 nm，扫描范围300～500 nm，激发和发射狭缝宽度均为5 nm。
1.3.7 肌原纤维蛋白SDS-PAGE分析
采用Laemmli[9]的电泳体系，参考姜启兴[10]的方法并做适当修改，样品质量浓度1 mg/mL，分离胶质量分数为12%，浓缩胶质量分数为5%。
1.4 数据统计分析
每次实验做3 次平行，结果用表示，采用SPSS 19.0软件进行数据分析，数据统计方法采用ANOVA进行LSD差异分析，P＜0.05表示差异显著。使用Origin 8.5软件作图。
2 结果与分析
2.1 牛肉蛋白质化学作用力的变化
由表1可见，离子键相对含量在加热初期与生鲜样品（0 min）相比显著下降（P＜0.05），并随着加热时间的延长呈不断下降的趋势，但在加热后期变化不显著（P＞0.05）。在110、115 ℃和121 ℃加热15 min后离子键相对含量分别下降了71.3%、88.4%和92.2%。氢键相对含量随着加热时间延长呈急剧下降的趋势，但在加热中期（6～9 min）变化不显著（P＞0.05）。121 ℃加热3 min后，氢键相对含量比110、115 ℃下降幅度高，达到57.8%；说明加热温度越高，氢键出现断裂的时间点越早。结果表明随着温度升高，离子键、氢键发生了断裂，相对含量减少。离子键和氢键是相对于疏水相互作用和二硫键较弱的键合力，在加热初期就能被破坏，而在加热后期无明显变化[11]。
表1 不同处理温度和时间对牛背最长肌蛋白质间化学作用力的影响
Table1 Effects of temperature and heating time on chemical forces of beef longissimus dorsi muscle proteins
凝胶成像仪（凝胶成像系统）
2凝胶成像仪的图像上面亮下面暗怎么回事
灯光显示器故障。凝胶成像仪是一种投影设备，用户在使用时的图像上面亮下面暗是灯光显示器故障造成的，只需要到专业的维修店进行维修即可解决。
3biorad凝胶成像仪怎么拍明场
1、首先，打开电源（仪器左侧靠后）。2、其次，将胶放在台面上,点亮TranUV键。3、最后，双击电脑桌面上QuantityOne图标，启动成像软件，按File到GelDoc的流程进入成像界面即可。
4猪支原体抗体阳性表示什么
：猪支原体肺炎在我国广泛流行，为查清该病在山西省流行情况，对部分种猪场和散养户进行了流行病学调研，证实猪群咳嗽、气喘现象较为普遍；对疑似病猪、死猪采集病料，用PCR试剂盒检测猪肺炎支原体病原阳性率为26%以上；对非免疫猪群抽检血样，用ELISA试剂盒检测猪肺炎支原体血清抗体阳性率为36.7%以上。以上调研证明，山西种猪场猪支原体肺炎感染较为严重，与临床调查结果基本相符。可能与山西昼夜温差大，养猪户只重视保温、不重视通风，绝大多数养猪户不接种猪肺炎支原体疫苗有一定关系。为今后山西省防治该病提供了重要依据。
关键词：猪肺炎支原体；流行病学；调研
猪支原体肺炎（MPS）是由猪肺炎支原体（MH）引起的猪的一种慢性、接触性呼吸道传染病，以咳嗽、气喘、生长缓慢为特征，在世界范围内广泛流行，主要通过鼻腔接触和空气传播。病猪表现为咳嗽和气喘，肺部肉样或肝样病变。患有该病的慢性病猪，易诱发其它呼吸道疾病，增加病死率，并且该病一旦传入猪群，很难彻底清除。病猪日增重降低约17.4%，饲料转化率降低约14%。在德国汉堡召开的第18届IPVS（世界猪病大会）上发表的资料表明，猪肺炎支原体是猪呼吸道病综合征（PRDC）的主要病原体之一，阳性率达82.5%。山西昼夜温差大，环境污染严重，饲养条件不好，使该病成为常见病、多发病，严重危害养猪业的发展。本病是高发病低死亡，其防治不被养猪业者重视。笔者于2009年4—7月对猪支原体肺炎在山西省的流行情况进行了流行病学调研，现将结果总结如下。
1.材料与方法
1.1流行病学调查方法
笔者对太原、晋中、阳泉、长治、忻州、原平等地市10个饲养100头母猪以上规模的种猪场、饲养30头母猪以下规模的散养户、门诊病例及3个屠宰场进行调研。调研内容：没有免疫过猪肺炎支原体疫苗的猪群是否有咳嗽、气喘、生长速度降低症状及屠宰后肺部病变，对疑似感染猪及屠宰时肺部有病变的猪采集病料检测病原，对非免疫猪群采集血样检测抗体，并做好详细记录。
1.2病原、抗体检测材料及检测方法
1.2.1检测材料对有呼吸道症状的疑似感染猪肺炎支原体母猪、仔猪、肥育猪每头活体采血5 mL，用鼻拭子采集呼吸道分泌物；对屠宰场和门诊病例肺部有病变的猪采集支气管和有病变的肺部组织，用咽拭子采集呼吸道分泌物，放-70℃冰箱保存备用。对非免疫猪每头采血3-5 mL。
1.2.2检测试剂猪肺炎支原体PCR检测试剂盒与猪肺炎支原体血清抗体ELISA检测试剂盒。
1.2.3实验仪器PCR仪、低温高速冷冻离心机、电泳仪、紫外线凝胶成像仪、酶标仪、洗板机等。
1.2.4病原检测方法按照猪肺炎支原体PCR检测试剂盒的操作步骤进行：样品处理（组织样品处理、全血样品处理、阳性对照处理、阴性对照处理）→DNA的提取→PCR扩增→电泳→凝胶成像→拍照→结果判定。紫外线灯下观察，在阳性对照出现187 bp扩增条带、阴性对照无条带出现时，实验结果成立。被检样品出现187 bp扩增条带为猪肺炎支原体阳性，否则为阴性。
1.2.5抗体检测方法按照猪肺炎支原体血清抗体ELISA检测试剂盒操作步骤进行：全血样品处理→稀释血清→加样→洗板→加酶结合物→洗板→显色→终止→酶标仪判定。空白孔调零，在酶标仪上测各孔的OD630值。
若样品OD630≥0.42，判为阳性；若样品OD630＜0.38，判为阴性；
若样品0.38≤OD630＜0.42，判为可疑，建议重新检测；
若重复检测结果仍在0.38~0.42，判为阳性。
2.结果
2.1流行病学调研情况
2.1.1流行特点笔者调查发现，该病一年四季均可发生，但寒冷、气候多变的季节多发；塑料大棚饲养、10-35 kg的仔猪多发；饲养管理不善、卫生条件差、饲养密度大、通风换气不好的猪场多发。仔猪感染后可发生死亡，肥育猪多为慢性或隐性。病原体随猪咳嗽、喷嚏及分泌物排出体外，主要通过呼吸道感染健康猪，该病可长期在猪群中流行。猪群发病以慢性型为主，有呼吸道症状的猪占猪群总数的30%以上。
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2.1.2临床症状急性型表现突然发病，呼吸加快，张口喘气，发出拉风箱似的喘鸣声，口鼻流出带泡沫的分泌物，一般体温没有变化。慢性型表现体温不高，咳嗽，次数逐渐增多，尤其在早晨活动后和采食时连续咳嗽，咳嗽时站立不动、低头、伸颈、弓背，直到把分泌物咳出为止；严重的精神萎靡，采食量下降，行动无力，可视黏膜发绀，呼吸困难，有明显的腹式呼吸，呼吸快而用力，张口喘气，病猪消瘦、生长缓慢。如果混合感染或继发感染猪蓝耳病、猪传染性胸膜肺炎等，则体温升高。
2.1.3病理变化尸体剖检眼观病变主要在肺部。急性病例肺高度膨大，被膜紧张，几乎充满整个胸腔，有程度不同的水肿、气肿，并且为灰白、灰红、橘红色；病变部位切面湿润、致密、膨胀，挤压时小支气管流出灰白色带泡沫的液体。慢性病例，两侧肺的心叶、尖叶、中间叶呈对称性的外观似鲜肉样、胰样、虾肉样的病变，与健康组织界限明显，对称性典型病变猪占50%左右；从小支气管可挤压出灰白色带泡沫的浆液或混浊黏稠的液体，肺门淋巴结、支气管淋巴结和纵隔淋巴结肿大，呈灰白色，切面外翻湿润。继发感染链球菌病、副猪嗜血杆菌病时可见关节炎、脑炎、心包炎、胸膜炎和腹膜炎等。继发感染猪蓝耳病时肺小叶间质增宽，呈明显的弥漫性、间质性肺炎。继发感染猪传染性胸膜肺炎时可见化脓性肺炎。对3个屠宰场屠宰的2600头猪的肺部进行肉眼观察，有病变的猪为1196头，占46%，其中有对称性病变的猪为813头，占肺部有病变猪的68%，占总数的31.3%。
2.2猪肺炎支原体病原、抗体检测结果
2.2.1病原检测结果疑似病猪、死猪的血清、鼻咽拭子、肺组织的猪肺炎支原体病原检测结果见表1
表1猪肺炎支原体病原阳性率%
注：血清、鼻拭子基本上采自同一头调查猪场和门诊病例的疑似病猪；鼻咽拭子以鼻拭子为主，咽拭子从活体中不易采集，是从病死猪中采集的；野猪是从2个发生呼吸道病的野猪场的6头病死猪体采集的。
2.2.2血清抗体检测结果未免疫猪肺炎支原体疫苗猪场的母猪、仔猪（10-35kg）、肥育猪（35 kg后）的猪肺炎支原体血清抗体检测结果见表2。
表2猪肺炎支原体血清抗体阳性率%
3.小结与讨论
（1）猪肺炎支原体病原、抗体检测结果表明，山西种猪场猪支原体肺炎感染较为严重，与临床调查结果基本相符。可能与山西昼夜温差大，养猪户只重视保温、不重视通风，绝大多数养猪户不接种猪肺炎支原体疫苗有一定关系，为今后山西省防制该病提供了有力的依据。
（2）试验证明，即使猪群感染了猪支原体肺炎，在血清中基本上检测不出其病原体，在鼻咽拭子中可以检测出病原体，但没有血清抗体阳性率高，这可能与病料的采集时间（感染期后）有关；有肺部病变病料的病原阳性率比用鼻咽拭子采集的病料高出10个百分点。对非免疫猪场，采用ELISA试剂盒检测猪肺炎支原体血清抗体能够较客观地反映猪群的实际感染情况。因此，对免疫猪场采用鼻咽拭子活体采集病料、病死猪采集肺部病变组织检测病原体，对非免疫猪群采血检测抗体，可作为诊断感染猪肺炎支原体的依据。
（3）猪肺炎支原体定植于上呼吸道纤毛，导致纤毛功能降低，不能有效清除呼吸道中的碎片及侵入的病原菌，并且猪肺炎支原体和其它细菌协同感染导致地方性肺炎的发生。因此猪群经常出现并发感染或混合感染，给养猪业造成了严重的经济损失，应引起养猪户的高度重视，应采取接种疫苗、改善饲养条件、加强饲养管理等综合性防控措施严防本病的发生。（资料来源：姚敬明 张李俊 吴忻 孟帆 王娟萍 韩一超 樊振华 雷宇平）
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