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本文主要内容一览

根系分析仪(winrhizo根系分析仪)
1有没有检测金弹子树的仪器
没有检测金弹子树的仪器,
可以用肉眼来变别一、看外形
野生金弹子树一般是生长在悬崖峭壁等恶劣环境下的,其根系攀附石头的能力也非常强,所以在崖壁上时有发现。而且野生的金弹子树在外形上也非常独特,不仅奇形怪状,还显得非常自然和苍劲,完全没有人工修饰、雕琢的痕迹。而且通常情况下野外生长的金弹子树没有人工培育的规整。
二、看色泽
由于野生的金弹子树在恶劣的环境中经过长期的日晒雨淋,其主干部分基本上已经出现碳化现象,所以基本上呈黑色。但有不良商家用墨汁来盆土树桩以冒充碳化桩。所以,我们需要细心识别。可以通过浸湿手指触摸黑色树桩看时候有掉色现象来判断是否是野生金弹子树。
三、看根系
金弹子树的根系一般具备阴根与阳根,阴根是埋在土壤之下的,由于没有接收到光线,很难长出不定芽,而且乌黑发亮,形态丰富,不少人将其制作成提根盆景观赏。而阳根是长期裸露于土壤之外的,往往会长出不定芽。通常人工培育的金弹子树一般很难长出不定芽,野外生长的却比较容易出现。
另外,在野生条件下的金弹子在果型上一般有两种,即长果与圆果,但果色多为金黄色,偶尔也能见一些血红色,但这都是变异而来的品种。

根系分析仪(winrhizo根系分析仪)
2植被砼护坡绿化一般施工方案
植被砼护坡绿化一般施工方案具体包括哪些内容呢,下面中达咨询招投标老师为你解答以供参考。
一、工程概况
坡面为岩石坡面(混凝土坡面),坡面稳定,坡面岩石纹理发育完好或微风化,坡比1:1~1:0.3。
二、边坡绿化施工方法、技术措施、施工设备
1、施工技术
岩石边坡绿化技术采用三峡大学专利技术:植被混凝土护坡绿化技术,本技术已申请四项国家技术专利。已取得三项专利证书,并已在清江高坝洲、隔河岩、三峡、江苏、山东、湖南、云南、四川等地推广应用30余万平方米。
2、草种选择
草种混配配方:禾木科狗芽根___%,弯叶画眉草___%,多年生黑麦草___%,紫花苜蓿___%,柠条___%,胡枝子___%。
禾木科狗芽根,多年生草本植物,属暖季型草坪。该草具有匍匐茎和根状茎,繁殖快,生长势强,易在短期内形成草坪,叶片细长,需要较多的肥料和水份,耐低矮修剪,适应性强,耐盐碱、耐践踏,养护管理较粗放。
弯叶画眉草:暖季型草,丛生,叶细长,根系非常发达,深达90㎝,抗寒、抗旱性极强。
多年生黑麦草:冷季型草,丛生,—30℃的低温能安全过冬,建植速度快,抗病虫能力强,能够迅速覆盖坡面,为其它植物生长提供良好的环境。
紫花苜蓿草:为直根系植物,主根非常发达,具有根瘤共生特性,能够固定空气中的氮,非常抗旱、抗寒和耐瘠薄土壤,能改良土壤理化性质,提高土壤肥力,可形成匍匐茎,开美丽的紫色小花。
混配种子组合,适宜于施工地区的温度气候,且具有极强的保土护坡固砂的特性,冷暖季节混配确保边坡稳定绿化。
3、施工流程图。
4、开辟坡顶施工通道,清除防碍施工的杂草杂物。
5、坡面清理,坡面清理的目的:一个是危石清理。另一个是达到坡面平整,以利植物生长及养护。
6、挂网锚固。绿化用__#铁丝网、网孔___㎝×___㎝,网网搭接___~___㎝,网挂至坡顶排水沟处,用φ___螺纹钢,长___cm~___㎝,间距___m×___m锚固。锚钉外露___~___㎝网距坡面___—___cm处与锚钉绑扎。(坡面需加固的可另行设计锚杆的直径和长度)
7、土壤选择加工。沙壤土,含砂量___%以内,客土拖运,翻晒凉干,粉碎过筛。
8、植被砼喷植,植被砼喷植厚度平均___㎝,分为两层,基层和面层,基层___㎝,面层厚度___㎝,面层含有草种,喷植时喷管头与坡面垂直,且与坡面距离不超过___m。
9、排水孔。以___m×___m的间距设简易排水孔,坡面有明显渗水的位置,需钻孔___㎝,并安装塑料排水管。
10、草种。草种为混合草种,冷季草和暖季草搭配使用。
11、覆盖。用无纺布覆盖,保墒、防晒。
12、养护。养护以喷灌为主,施工期养护用黑色硬塑料管组成喷灌网,安装摇臂喷头喷灌,以保证幼苗所需的水分和养份,完工后继续养护半年。景观要求较高的工程,可设置永久喷灌系统。
13、施工设备
空压机___台、手风钻___台、搅拌机___台、喷射机___台、自卸车___台、电焊机___台、粉碎机___台、高压泵___台。
三、确保工程质量的措施
1、建立建全质量管理制度
项目经理部下设工程技术科和中心实验室,负责质量工作。各施工队设质检组,配专职质量检查员,各施工点还设兼职质检员,形成一个三级质量管理网络。对全体职工进行质量教育,实行工程质量与工资挂钩,制定奖罚条例。即根据各项分段工程施工的质量好坏,项目经理部的每部门都设质量奖、奖罚分明。第一级质管人员的资金与被检部门不发生直接联系,以提高质管工作的相对独立性。
工程技术科和中心实验室在总工程师的领导下开展工作,监督检查主要范围如下:
(1)各种材料的质量和规格是否合格;
(2)分项工程的施工工艺和操作方法是否符合规范;
(3)工程质量是否符合《技术规范》要求,对不合格的工程不验收,坚决“推倒重来”;
(4)原始记录是否及时、准确、完整;
(5)定期检查各种施工机械的性能状态是否良好;
(6)计量和试验是否正确,符合规范;
(7)推行TQC是否认真,对薄弱环节是否采取有效措施;
(8)施工人员是否持有上岗证,防止窜岗施工;
2、建立质量责任制
制定各部门、各岗位质量责任制,使责任到人。制定各分项工程的质量目标,以便管理。各分段施工的施工员要对本段的施工质量负责;各施工队负责人要对本队所在工区的各段施工的质量负责;项目经理的各个部门要对全线工程的各种分管项目质量负责。这样就做到了层层落实,理顺了质量管理体系。
3、开展质量教育及技术培训
组织投入本合同段的人员认真学习《技术规范》并认真做好质量教育工作。新工人必须经过上岗培训,积压工种必须持证上岗。经常宣传和阐明工程质量的重要性,使全体人员树立“质量第一、业主至上、预防为主、用数据说话”的观点。
4、建立中心试验室
在项目经理部设中心试验室。中心试验室配备常规土工试验、砼试验以及混合料配合比例及其他较复杂试验工作的仪器设备,以满足本工程所需项目的试验服务。中心试验室配备即有理论又有实践和经验的一名试验工程师,两名试验助理工程师,在工程师监督下工作。另外,中心试验室还全面实施对工程所用原材料或试件等的检查和质量控制。
5、建立开工前技术交底制度
开工前请设计代表交底,并提出施工图中不详或不清楚的技术问题,便于以后的施工。各分项工程开工前,要根据监理工程师批准的施工组织计划向施工人员交底,讲清讲透,严格按照施工组织计划施工,确保工程质量。
6、采取项目挂牌制
目的是加强职责,明确范围,促进联系,方便监督。
(1)在经理部、各施工队的驻地,项目负责人及生产、技术、质管、测试负责人以及各级派驻监理都要挂牌;
(2)主要材料及工艺的质量标准和质量统计要挂牌;
7、开展质量评比活动,实行优质优奖
项目经理部的下属施工队以分段施工为单位,进行流动红旗竞赛,每月评比一次,以质量、进度、安全为主要评比内容,对获红旗的单位给予奖励。平时,工程技术科人员要经常深入现场进行质量跟踪。
检查,发现问题及时督促改正,确保工程质量。并且根据质量跟踪检查的情况,做好质量奖评比依据,实行优质优奖。
四、确保工程工期的措施
1、本合同投标的工期确定为天。工期控制是施工企业管理的内容之一,也是反映综合管理能力的一项重要指标。我们将为自己树立一个良好的企业形象,在创造优质工程的同时,也要按期地完成施工任务,为业主早日带来投资效益,因此,我们保证在天如期完成施工任务,为达到此目的,将采取以下措施:
(1)开工前,我们将组织工程技术人员和有关方面专家对工程的环境条件下进行了详细调查,充分掌握工程第一手资料,对工段的地理、地质情况、水电、道路分布情况做出一个全面的估价和分析,对工程所需的地方材料供应以及机械、设备、人员进入施工现场的途径做出详尽的计划和必要的落实。
(2)迅速投入现场的准备,争取7天内全部结束施工前期准备工作。
(3)在全公司范围内进行思想总动员,以崭新的精神面貌投入到该工程建设行列中去,并将该工程的建设规模、总工期、质量要求等贯彻到每一个职工心中,使全体工作人员上下一条心。
(4)尊重科学、尊重试验、质量第一、严字当头。强化施工人员的质量意识。一切按“技术规划”和有关“施工规范”施工,并积极开展群众性TQC小组活动,建立和完善质量管理体系和质量保证体系,以质量求速度、保进度。
(5)加强工程计划管理,详细编制各分项施工进度计划,并应用文字和图表表示编制依据、工程特点、施工方法、工艺流程、材料设备和劳动力安排、施工质量和安全保证措施等内容,并使工程师满意。各分项工作按计划要求顺利进行,做到有条不紊。
五、确保安全生产的措施
1、对全体员工进行安全生产教育,认真学习、贯彻执行国家、省、市安全法规,职工劳动权益保障规定,安全文明施工规范,增强职工安全法制观念,坚持安全第一,预防为主的方针,搞好安全施工。其具体措施如下:
(1)从组织机构上级保证
设立绿化项目部,负责该工程安全生产及保卫工作,项目经理为组长(第一责任人),负责本工程的安全生产和保卫工作,各班组设专职安全员(班、组长为第一责任人),负责日常生产、生活的安全保卫工作。由项目经理、工程师、质量安全管理人员组成的安全管理体系,行成自上而下的逐级负责制,以确保安全生产。
(2)从制度上保证
由项目部组织施工队安全保卫组和安全员根据国家安全法规,健全和完善各种规章制度和条例。建立事故登记报告制度,一旦出现事故,应立即处理,并逐级报告、登记,杜绝重大事故的发生,以保证安全生产。根据各种不同的工种分别制定具体的安全生产实施工队细则,并在生产中认真贯彻执行,实行待证上岗制,上岗前对职工进行安全生产、劳动保护的教育和培训,增强职工安全生产和劳动保护的意识。
(3)从后勤上保证
搞好职工食堂,对采购的食品实行专项人检测制度,防止采购变质和有毒的食物,杜绝食物中中毒事故的发生。搞好个人卫生和环境卫生,美化环境,净化空气,创造优美的生产、生活环境,防止传染病和流行和传播,保证出勤率,以确保生产安全。
(4)从管理上保证
根据公司制定的安全生产奖惩制度,结合本项目经理部的实际情况,制定安全生产奖惩细则。对遵守国家政策、法律、法令,遵守劳动纪律,按安全法规和施工技术规范要求进行施工,维护生产、生活秩序,维护社会治安,有显著功绩的施工队、班组和个人分别给予奖励;反之,给予处罚,以保证生产、生活的有序进行,确保生产安全。
六、文明施工措施
1、施工现场设置醒目标志、标语、挂牌施工,并出简报、;黑板报,做好安全生产、文明施工的宣传工作。
2、统一布置,现场有条不紊,统一指挥,做到道路畅通。
3、做到工完料尽场地清,现场布置固定厕所,保证现场环境整洁,文明卫生。
4、由办公室牵头开展各种各样的劳动竞赛,使职工树立爱岗敬业的良好风气,增强主人翁意识。
七、环境保护措施
1、增强环保意识,加强环境保护,施工时,避免对周围环境造成不必要的损害,工程竣工后应对施工现场进行清理恢复,以保证环境美观。
2、处理好污水和垃圾,污水设便水池和非便水池,池四周抹水泥砂浆层,避免渗漏,顶加封盖,定期清理。污水池经常洒药灭菌和清理沉淀物,污水经清洁处理后方可排放,垃圾集中设放,定期送到当地指定地方存放或挖坑埋好,予以覆盖。
八、人员、组织机构
1、设立绿化项目部,项目经理1名、工程师1名,质量安全管理人员2名。
2、砼工___名
3、钢筋工___名
4、风钻工___名
5、电工___名
6、电焊工___名
7、机械操作工___名
8、普工___名
共计___名
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3水稻幼苗氮代谢研究方法
研究短期低氧胁迫对水稻幼苗根系生长、呼吸功能和氮代谢的影响,探讨短期低氧胁迫影响水稻幼苗根系形态、分蘖、生物量的积累、根系呼吸强度以及氮代谢的生理机制,并分析低氧胁迫对水稻幼苗根系功能和氮代谢相关酶活性的影响,为探明低氧胁迫对水稻幼苗的伤害及其保护机制奠定基础。【方法】正式试验于2015年在中国水稻研究所网室进行。采用国际水稻研究所营养液配方进行水培试验,以春优84和秀水09为材料,移栽行间距为20 cm,移栽7 d后利用在线溶氧仪设定2个氧浓度:低氧(0—1 mg·L~(-1))和对照(常规水培,不进行氧调节,水稻在自然状态下生长),处理时间为12 d。采用便携式溶氧仪(HACHHQ30d,美国)测定营养液中溶氧量。处理后每隔3 d测定分析根系活力、呼吸强度、氮代谢相关酶活性。处理结束时取样测定分析株高、分蘖、叶绿素含量、根系形态和干物重等指标。【结果】短期低氧胁迫处理抑制水稻幼苗的生长。处理结束时,秀水09分蘖数、干物质的积累量分别比对照降低20.0%和7.78%。春优84分蘖数和干物质积累量分别比对照降低15.38%和6.28%。2品种根系体积以及粗根(根系直径0.8 mm部分的根量)、细根(活性根,根系直径0.05—0.1 mm)根量也低于对照。叶片叶绿素含量、根系氮素吸收量以及可溶性蛋白质含量也受到低氧胁迫的抑制。秀水09各项指标分别比对照减少6.67%、15.11%和10.86%,春优84各项指标分别比对照减少5.18%、13.25%和6.67%,且秀水09的各项指标的减少量均大于春优84,说明秀水09对低氧胁迫较为敏感。2个品种的株高受低氧胁迫的诱导,秀水09比对照增加7.98%,春优84比对照增加3.30%。短期低氧胁迫对水稻幼苗根系呼吸强度的影响表现为抑制-促进-抑制,随处理时间的延长抑制作用会降低。根系活力的变化趋势同根系呼吸强度一致。水稻幼苗根系硝酸还原酶(NR)活性受低氧胁迫的诱导;根系谷氨酰胺合成酶(GS)活性在低氧胁迫0—6 d时受其诱导,9—12 d时受其抑制;低氧胁迫对水稻根系谷氨酸脱氢酶(GDH)活性的影响和品种有关,秀水09表现为促进-抑制,春优84则为抑制-促进-抑制。短期低氧胁迫处理抑制水稻幼苗的生长。【结论】水稻幼苗可以通过呼吸消耗、氮代谢相关途径的改变,减轻低氧胁迫的伤害,从而维持其在低氧逆境下生存。
4如何在家里做植物的组织培养
家庭组织培养
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的,当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的,装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 (无菌箱)1个 ,需要自己自制,用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的,小一点也可以,主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅(煮汤、面条的那种)买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个,用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干,
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干,用于做瓶口的塞子,要注意的是,棉花要使用普通做棉衣的棉花,不要用医院用的脱脂棉,这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干,用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把,刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个,2ml移液管1只、药棉若干。
二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的,其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的,并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素(家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。)共5种。也可以买市售的MS培养基
(1)、硝酸铵
(2)、硝酸钾
(3)、 氯化钙
(4)、硝酸镁
(5)、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸(PH 5.4-7.0)
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾(可以到医院或药材商店去买)
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂,他们都有比较准确的含量,你可以去按你的需要去配制比例。
爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术,尤其是快速繁殖,并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者,在充分利用家庭条件的基础上,同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到,一些比较名贵的园艺品种,比如:万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种,还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物,甚至于星球属、岩牡丹属等等,这些植物的常规繁殖系数很低,他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题,并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物,同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中,不但可以对培养的植物有更深一层的认识,对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家,最初都不是专业学组培的,就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是,爱好者有着浓厚的兴趣,非凡的观察力和细致入微的操作,这些都可以弥补非专业的缺陷,并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源,这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣,还可以有一定的经济收益,甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备:
进行组织培养,没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的,不适合家庭消费,但如果能有途径买到廉价的实验室设备,那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备,就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅:
接种箱:植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境,可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料,动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍,模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是,组织培养的接种箱的密闭性要求比较高,尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料,箱子的顶端按放两盏灯:20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料,因为这样便于观察,有时候接种箱还可以借用为培养箱,周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅:主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器,然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅,高压锅的压力要低于灭菌器,但是适当延长灭菌时间,还是可以取得较好的效果的。比如:对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果(灭菌器是20分钟);无菌水采用间歇灭菌法,先用高压锅压40分钟,放置24小时,再压20分钟即可达到效果。
2.场地:
这个就因人而易了,总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘,减少空气流动,最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房,但所使用的器具必须和厨具分开。一般说,组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的,除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质,需要认真保管,以免发生危险。
3.辅助设备:
主要指冰箱,它是用来储存化学物质和培养基的。天平,可以采用感量在100克的托盘天平,甚至用中药的药衡都可以代替。培养架,这个就更简单了,采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求,如果日光不足,可配合日光灯补光等。
4.化学试剂:
化学试剂是不可缺少的,因为组织培养的核心就是培养基的成分,而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的,比如大量元素(硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等)、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买,因为它们的用量很小,我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的,他们的称量需要借助分析天平,但这是家庭条件所不允许的,如果有条件可以借助关系单位代替配成母液,每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店(卖农药化肥的地方),它们一般出售农业用的激素,有的是用安瓿装的,按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来,有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉,只需要称取一定量加水即可,很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉,只需要称量40克,加1升水,用微波炉加热5分钟即可分装,相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞(剧毒),如果不容易搞到,可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时,可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器:
组织培养的容器要求并不高,只要玻璃颜色为透明色即可(钠玻璃不可以)。
我们可以到垃圾站去看看,捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶,我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可,如果不好找到,可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子,折叠成双层,用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器,比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替;一些度量仪器,如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买,恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它:
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸(5.4~7.0),需要买一本,大约花1.5元即可搞定;酒精灯也不需要买,用墨水瓶配上一个玻璃环,再加上一个棉花芯,最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒,这样的酒精灯很小巧,适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的,到花市的工具摊位上,花10元钱全部搞定,注意选比较小巧的工具。
关于用水,按理说应该使用蒸馏水,但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯,那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养,效果都是很不错的,更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂,主要突出了他们相关的替代品,因为作为组织培养中的快速繁殖,它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的,工厂化生产组培苗要追求高增殖率,所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确,只要达到培养成功的目的即可。当然,如果想提高增殖倍率和试管苗的品质,必须尽量贴近实验室的用具和器材,代用品总是有一定的缺陷的。
(一)必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱,可用于贮存培养基母液(4℃)及需低温贮存的药品(如生物调节剂)。
高压锅:它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水,进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅:它可用于培养基、溶化琼脂(起水浴锅作用)及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶:它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟:可以用于接种及盛放消毒液(若放消毒液,就不要再食用,以免中毒)。
日光灯:它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶:它可以用于组培培养之用,代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时,不要赶在家庭成员较多时进行,如室内已安装了空调,那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
(1)接种箱的制作:组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替,就可以大大节省开支,有利于普及。
自制的接种箱的用料,可以是胶合板、纤维板、玻璃(3毫米厚)、木条(装修房屋用的龙骨),甚至可以用使纸板的包装箱(包装箱的质量要稍好一些的,如电视机的包装箱),也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小,可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作,但相对来说消毒容易,且占地较少;制作较大的便于操作,但消毒工作显得不易,且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
(2)培养箱的制作:培养箱可代替培养室,也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作,或利用长方形鱼缸。因此,可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平(500克):用于称量配制培养基药品,或用称量金银、中药的戥子称,用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂;或购买微量元素及生物调节剂时,买已分装的。酒精灯1盏:用于接种时,灼烧消毒灭菌。漏斗(亦可用购买桶装食用油,所配给的漏斗):用于分装培养基用。长镊子2把:用于接种。解剖刀2把、刀片若干:用于接种。10、50、100毫升量筒各1个:用于配制培养基用。长把牛角勺2把:用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个:用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸:用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈:用于绑扎培养瓶口。脱脂棉:用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5~7)试纸1本:用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶:用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶:用于消毒。福尔马林1瓶:用于接种箱消毒(在每次操作前2~10小时,将10~20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内,在操作前取出)。MS培养基所需药品;用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠:用于调pH值。如若购置1盏紫外灯,进行室内及接种箱消毒更为理想。
(二)操作时注意事项
家庭操作与单位不同,因而要注意以下事项:要注意安全,妥善保管药品。特别对老人和小孩;操作时要消毒仔细严格,接种时操作人员戴好口罩、工作帽,避开电风扇及大风沙天气,家庭成员多时避免操作;消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间;药品称量要准确无误;如果家庭不具备温度调控(如调温空调),应避免在盛夏、寒冬进行;红掌组培要一步步来作,可先作容易组培的花卉,待取得经验后再做难作的花卉。
1.培养容器和玻璃仪器的准备:
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶,要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时,再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁,直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣,空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘,尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗,反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止,将移液管放置在一个长筒中,便于使用。一般移液管只能使用一次,即要清洗,所以有多必要准备几只移液管,建议:10ml/2支,5ml/2支,1ml/5支。
2.培养基的配制:
经典的组织培养用培养基是ms配方,其基本上划分为:大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级,用普通天平是难以称量的,为了解决这个问题,我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液,使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下:
大量元素:硝酸铵66.0克;
硝酸钾76.0克;
无水氯化钙13.3克;
七水硫酸镁14.8克;
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升,每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐:七水硫酸亚铁5.56克;
乙二胺四乙酸二钠(edtana)7.46克。
以上两种分别加热溶解,混合,定容到1升,调整ph到5.5以下,每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小,为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟,过滤留滤液,每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟,过滤留滤液,每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后,每升ms培养基还需要加入白砂糖30克,琼脂7克。
这里要说明的是,糖和琼脂都是可变的量,要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂,透明度更好。
上述各成分加入后,定容到800毫升左右,用微波炉加热,直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素(通常配制成0.1%溶液,这样每取1毫升,换算到培养基中就是1ppm)。然后加水定容到1100毫升(1.1升),之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基:
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉,大大简便了培养基的配制,根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例: ms培养基原粉,包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂,一般按使用方法称量,微波炉加热溶解,加入激素,定容到1100毫升(1.1升),调整ph值到5.8~6.0。
4.分装:
将配制好的培养基分装在培养容器中,注意要趁热分装,因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5,注意不要将培养基挂在瓶的外壁,这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口,用胶圈固定(胶圈尽量选择自行车的内胎,这种胶圈比较耐热)。
5. 灭菌:
采用家庭压力锅消毒,建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”,它们可以指示灭菌效果,当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内,加热到有大量蒸汽冒出,再加上压力伐,维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却,将培养基取出,放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备:
新制作的接种箱必须要清洁干净,尽量做到无死角。每次使用前2小时,将操作所需要的全部物品放入接种箱,再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内,在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液,大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现,这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒;同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的,紫外线进行第二道灭菌,在紫外线照射大约15分钟后,会激发氧气形成臭氧,臭氧作为第三道灭菌防线,这样经过三次灭菌,接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内,向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水,因为甲醛对人体有毒害作用,氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质,从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉,要继续照射,直到操作前5分钟关闭,维持黑暗5分钟,然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是,紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶,形成四聚体,但是微生物具有一种光复活蛋白,可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体,而使微生物复活,这个作用叫做“光复活作用”,所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟,避免光复活作用的出现。
怎样在家庭开展组培工作
制备
家庭组培因受到条件的限制,不可能配置大量的配养基,,一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后,分装成35-40瓶,塞好棉塞,包好包头纸。(棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制,不能使用脱脂棉,然后用纱布包紧,用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。)然后放入高压锅里高压灭菌,待高压锅喷嘴喷出蒸汽时,扣上压力阀,从压力阀喷气时起计时,连续维持15-20分钟后关火,压力消失后,打开锅盖,取出配养基,放入接种箱内待用。初次实验时,灭菌后的培养基应放置三五天后,观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出,这说明灭菌时间不够,,需要适当增加灭菌时间。
接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内,因接种箱内的体积相对较小,所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上,不能随意摆放,箱内湿度较大,点酒精灯一定要是用打火机,不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器,尽可能地大一些,因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后,将一装有10-20ml福尔马林的磁杯放入箱内(最好不要使用玻璃杯,因反应时温度较高,容易炸裂。),倒入2-5g高锰酸钾(PP粉),使其蒸气充满箱内,达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好,避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后,才能开始接种工作,这段时间大约需要5-10个小时。
接种时,揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物,取出熏蒸用的磁杯,将接种用的材料送入接种箱内,开启紫外线灯,十五分钟后关闭紫外线灯,开启照明灯,即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念,要把一切物品都看成是带菌的,要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高,湿度较大,手容易出汗,所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指,也可以戴指套。另外,操作时要注意防火,由于空间较小,一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时,要将瓶口置于酒精灯上方,用右手的无名指和小指夹住棉塞尾,轻轻将棉塞拔出,棉塞不能置于箱内物品上,应用手指夹住,接种后,将瓶口在酒精灯上烧灼一下,棉塞也烧灼一下,,然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好,扎好包头纸,用铅笔标明品种、接种日期、编号等,然后重复下一瓶。
其实,用接种箱接种与超净工作台相比较,工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的,操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。
培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控,所以要充分的利用自然条件,接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方,如靠窗的书柜、写字台上,但要避免日光直射,一般室温在22-28摄氏度时都能正常生长,不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低,可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱,里面装一两个15-25瓦的白织灯,既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时,有条件的可以摆放在空调室内,,没有空调室的,降温虽然困难一些,但大多数试管苗是可以耐受的,不至于死去。小苗长出后,摆放在书柜或工作台上,感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵,无疑是一种享受。
栽培
当小苗长到一定的时候,就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根,待长出一定根系时,就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面,一是要适当降低温度;二是要增大湿度;三是要严格控制杂菌危害;四是要保证种植介质的疏松透气;五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质,把小苗种植后用百菌清喷雾浇根,盖上塑料薄膜,少量的小苗干脆用玻璃杯盖住,大约15天后就能揭去覆盖物,便可进行正常管理了。
家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情,只要多开动脑筋,多想一些办法,做起来也是很容易地。万事开头难,办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长,原来条件不允许,科研经费很紧张,刚开始的时候,一年的科研经费只有3000元,那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草(石斛)种子的无菌培养、体细胞融合,都获得了很好的成绩,我们就是用这种方法做的,当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊,他们认为很珍贵的组培小苗,被我们丢得到处都是,觉的不可思议,他们做不出来的,竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功,而是告诉想从事这个行业的朋友,不要自己把自己的能量看得太低,也不要迷信权威、只要自己有信心,严格地按照科学的规律去做,没有什么做不了的,没有什么办不到的。
家庭组培培养基的选择与效果评价
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑:一是基本培养基;二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物,B5和N6培养基适合与许多单子叶植物,特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效,White培养基适合于根的培养。
首先试用这些培养基进行初步实验,可以少走弯路,大大;减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后,可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。
在进行调整时,以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时,硝酸盐的作用比铵盐好,但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移,若同时加入硝酸盐和少量铵盐,会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时,培养的植物会表现出一些症状,可根据症状加以调整,如氮不足时,培养的组织常表现出花色苷的颜色(红、紫红色),愈伤组织内部很难看到导管分子的分化;当氮、钾或磷不足时,细胞会明显过度生长,形成一些十分蓬松,甚至呈透明状的愈伤组织;铁、硫缺少时组织会失绿,细胞分裂停滞,愈伤组织出现褐色衰老症状;缺硼时细胞分裂趋势缓慢,过度伸长;缺少锰或钼时细胞生长受到影响。
培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况,所以应仔细分析,不可轻易下结论。


