细胞冻存步骤（细胞冻存是什么意思）

细胞冻存步骤

今天我们聊聊细胞的冻存。

细胞冻存步骤（细胞冻存是什么意思）

实验开始前，细胞冻存步骤，要先做好准备工作：

将冻存管、离心管、移液管、移液器等耗材准备齐全，细胞冻存步骤，放入超净台中，打开紫外线照射30分钟。打开通风机通风3分钟。用75%酒精擦拭操作台和双手。准备好冰盒。

将离心机调节至所需转速，细胞完全培养基、DMSO、胰酶等放于37℃水浴箱中预热。

冻存步骤：

1、取出细胞，酒精消毒，放入超净台。

Tip1：应在细胞生长良好、致密度约为80-90％，活力达90%以上的状态下冻存。细胞活力差的细胞在冻存后的成活率很小，因此，一定要在细胞旺盛分裂时期冻存。

2、配置细胞冻存液：按无血清培养基：血清：DMSO=7:2:1的比例配置细胞冻存液。

Tip2：DMSO应为试剂级等级，无菌且无色，可以用0.22微米滤膜过滤，或者直接购买无菌产品。以5-10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。

细胞冻存是什么意思

细胞冻存与细胞复苏，是细胞培养过程中的常见工作。

细胞冻存，是指将细胞贮存在超低温环境中，使细胞暂时“冬眠”的技术，细胞冻存步骤，在需要的时候再进行复苏。

细胞复苏，是把冻存在-80℃冰箱或液氮中的细胞快速解冻，并使细胞重新恢复生长的技术。

本文普诺赛将为大家介绍细胞冻存与复苏的技术要点和操作步骤。

冻存原则

细胞冻存原则为“慢冻”，即让细胞在缓慢降温的条件下逐渐冷冻。

如果直接将细胞悬液放在超低温下快速冷冻，细胞会受到冷冻损伤而死亡。在冻存液中添加的保护剂（如DMSO、甘油）和在冻存盒中添加的异丙醇，都起到程序性降温的作用。

DMSO使用注意事项

DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中，延缓温度下降速度，减少细胞内冰晶的形成，从而起到保护细胞的作用。

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细胞复苏的原则：快速融化

必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

实验前准备

1.将水浴锅提前预热至37℃。

2.细胞实验室进行常规消毒，用75％酒精擦拭紫外线照射40min的超净工作台台面，保证无菌。

3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等即将使用的耗材及试剂。

取出冻存管

1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的对应编号。

2.从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。

迅速解冻

1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断地摇动，使管中的液体迅速融化。

2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，细胞冻存步骤，再拿入超净台内。