细胞计数板
D-PBSA胎牛血清大豆胰蛋白酶抑制剂添加激素的黑素细胞培养液胰蛋白酶和EDTA混合液组织培养皿吸管离心管湿润的培养箱水浴箱电子细胞计数仪或血细胞计数板
细胞计数板（细胞计数板怎么数细胞）
步骤
原代培养第1天1.用70%乙醇浸洗皮肤标本，细胞计数板，然后用D-PBSA浸洗2次。2.将组织移入无菌100mm培养皿，表皮面朝下。3.用解剖剪除去皮下脂肪和深部真皮。4.将剩余的组织用手术刀切成2mm×2mm小块。刀片在组织上摇动，但不要采用锯切。5.将组织块移入盛有冷的0.25%胰蛋内酶的15ml离心管。6.在室温条件下，将组织块孵育60~90min。对于某些供体的皮肤，先在4°C条件下孵育18~24h，然后在37°C条件下孵育1~2h，这样可获得较多的黑素细胞。第2天7.轻拍离心管，使沉于底部的组织块移动。然后，将离心管内的内容物快速倒入60mm培养皿。8.用手术镊将组织块逐一地移入100mm干培养皿，上皮面朝下。轻轻摇动组织块，使其接触培养皿底壁。应使表皮层附着在培养皿上，细胞计数板，以便用手术镊彻底分离真皮。除去真皮片。9.将表皮片移入盛有5ml0.02%EDTA（0.7mmol/L）的15ml离心管。注意将表皮片放入EDTA液，不要贴在离心管壁上。10.轻轻摇晃离心管，使表皮片分散成单细胞。11.离心（350g，5min），然后吸去上清液。12.用MHSM混悬细胞。13.用血细胞计数板计数细胞，然后在35mm培养皿用2ml含有5%FBS的MHSM孵育细胞，细胞密度为1×106个（约2×104~4×104个黑素细胞）。FBS促进细胞贴壁。14.用含有生长因子和牛垂体提取物的MHSM换液，每周2次。第3~30天15.培养24h后，培养的细胞中含有原代角质形成细胞和散在的黑素细胞。角质形成细胞在几天后停止增殖，角质形成细胞克隆在第2周浮起。第2周末，只剩有黑素细胞。在大多数情况下，细胞在2~4周内生长接近汇合，此时准备传代。
细胞计数板怎么数细胞
细胞复苏的原则：快速融化
必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
实验前准备
取出冻存管
迅速解冻
平衡离心
用架盘天平平衡后，放入离心机中3000r/min 离心3分钟。
制备细胞悬液
细胞计数
细胞浓度以5×105/ml为宜。
培养细胞
将符合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入37℃，5％CO2的培养箱内2-4h（或者24-48h）后换液继续培养培养，换液的时间根据细胞情况而定。
记录复苏日期
结果分析
判断细胞复苏成功与否，细胞计数板，需要看复苏后细胞贴壁率及细胞存活率（细胞存活率将冻存管内剩余的细胞，台盼蓝染色法检测复苏细胞的存活率。呈蓝色的细胞为死细胞，活细胞不着色。用细胞计数板和计数器计数细胞，得出细胞存活率）。
细胞计数板计算公式
我们知道，靠我们的肉眼是看不到精子的。在人体内有很多细胞，血液里面的红细胞、白细胞、血小板，精液里面的精子。而细胞的大小，靠我们的肉眼是没法看到的。得益于显微镜，细胞才展现在我们眼前。而精子是1677年显微镜学家列文虎克首次报道的。
说到显微镜，我们还得再复习一下中学物理。显微镜的原理简单地说就是微小物体反射的光经过物镜、目镜等一系列透镜，放大呈现在我们眼前。其中涉及一个很重要的概念叫“调焦”。医用显微镜调焦一般是通过被观察物体与物镜之间的距离来实现的。因为只有在离物镜特定距离的物体才能清晰地成像，所以在观察精液标本时得把标本变“薄”。现实操作是将标本滴在载玻片上，上面再盖上盖玻片。这里我盗用一下三体里的概念“降维打击”。把这个步骤理解为将立体三维的精液标本“降维”成“二维”的（实际上只要有厚度就不能称为二维，这只是概念上这么理解）。降维后一方面将观察精子这些微观事物通过显微镜观察到，细胞计数板，另一方面也给对他们计数提供了可能。
