染色质免疫共沉淀
基于这一思路,染色质免疫共沉淀,南开大学和中科院生物物理所的联合研究团队,通过白血病克隆形成实验、细胞核染色观察、染色质免疫共沉淀等手段验证了DOT1L-AF10-DOT1L复合体的寡聚形式与相互作用,对白血病细胞的增殖和去分化至关重要。他们还发现,这种寡聚形式对MLL1-AF10招募DOT1L到特定基因区域,进而影响下游白血病相关基因的表达水平。

染色质免疫共沉淀(染色质免疫共沉淀结果怎么看)
“简单来说,我们进行了白血病细胞形成的实验模拟,染色质免疫共沉淀,克隆了白血病相关细胞,通过实验解析了MLL1-AF10致癌融合蛋白招募DOT1L的结构基础和分子机制,发现除了AF10-DOT1L之间的相互作用外,二者形成复合体的寡聚形式同样对MLL1-AF10融合蛋白的致病性起到关键作用。这一发现为基于AF10-DOT1L相互作用和寡聚体的干扰剂的设计和开发提供了重要依据,也为急性白血病的治疗提供了新思路。”杨娜说,如果还拿连衣裙举例,寡聚形式就是花边的数量变多了。这次实验证实,除了花边位置发生变化,也就是“粘”到袖子上会破坏连衣裙的样式外,染色质免疫共沉淀,花边数量变多、花边种类改变同样会破坏连衣裙的样式。
染色质免疫共沉淀结果怎么看
染色质免疫沉淀分析(ChIP)是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的比较好的一种方法。so,我们今天来聊聊染色质免疫沉淀分析方法。
染色质免疫沉淀法(Chromatinimmunoprecipitation,ChIP)是研究体内DNA与蛋白质相互作用的重要工具。它可以灵敏地检测目标蛋白与特异DNA丨片段的结合情况,还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系。
CHIP技术通过三大步骤实现:第1,甲醛固定后染色质分离和断片;第2,运用特异蛋白质抗体(CHIP级别),免疫共沉淀结合蛋白的染色质片段;第3,分析目标DNA。
这里我们就要说到CHIP技术工具之——植物染色质免疫沉淀试剂盒了。它的原理是什么呢?不妨以P-2014植物染色质免疫沉淀试剂盒来举个栗子~~
染色质免疫共沉淀原理
这项研究围绕这个问题进行了分子机制研究。通过细胞培养和临床肝癌患者的样本分析,研究证明了乙肝病毒HBV相关肝癌的肿瘤组织中经常表达URL1蛋白。通过细胞实验,HBx蛋白能够激活URL1的启动子。HBx不含DNA结合结构域,而是通过影响表观遗传机制或信号转导因子间接调节靶基因。该研究接着证明了c-MYC参与了HBx诱导URL1的机制。c-MYC是一个报道较多的因子。目前报道表明,HBx能通过抑制c-MYC的泛素化增加该因子的稳定性,并且促进c-MYC诱导肿瘤形成。临床样本分析也表明,乙肝病毒HBV的整合在c-MYC上的频率在早发型HBV相关肝癌样本上明显高于晚发型HBV相关肝癌样本。研究对临床样本进行染色质免疫沉淀分析,结果表明与非肿瘤肝组织相比,乙肝相关肝癌的肿瘤组织中URL1启动子区c-MYC的招募显著增加。研究还表明,GACGCG序列也在乙肝相关肝细胞癌中起到与c-MYC结合位点的作用,这可能是c-MYC在肝癌中频繁出现的机制。该研究还发现,URL1和HBx可能存在竞争性转录,一方面,URL1会与RPB5相互作用,抑制RNA聚合酶2的定向转录,另一方面,HBx也与RPB5结合,此时并不与URL1结合,染色质免疫共沉淀,形成一个三聚体复合物以导致HBV启动子的反式激活。这些结果提示HBx与c-MYC参与了乙肝相关肝细胞癌中URL1的表达。但是关于URL1在其中的确切致病作用仍然有待进一步研究。

