上样缓冲液
PCR技术说简单也简单,上样缓冲液,说复杂也很复杂,一点小的不足就很有可能与正确结果擦肩而过,此之谓牵一发而动全身。所以严谨的试验态度非常重要,上样缓冲液,同样重要的还有优质的试剂与仪器。三狮生物推出了多个种类、多种规格的核酸提取试剂盒,Taq酶,Taq酶预混液等普通PCR试验的全线商品,以及琼脂糖、TAE速溶粉末,核酸染料,上样缓冲液等全套琼脂糖凝胶电泳所需试剂,总有一款适合你,赶快行动起来吧!
雅酶蛋白上样缓冲液
GelRed既可用于预制凝胶也可用于电泳后染色。通常电泳后染色的灵敏度更高,并能排除染料对DNA迁移的干扰。使用GelRed进行电泳后染色,操作简单不需要脱色和特殊溶液。只要将染料稀释在0.1MNaCl中,并将凝胶置于染色液中,30分钟后就可以观察。染色液在室温下极为稳定,可以多次反复使用。相比而言,预制凝胶由于不需要额外染色过程,因此染料用量更少,更为简单经济。
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GoldView系染料
GoldView系染料是在国内市场比较流行的一类染料,上样缓冲液,由于产品宣称低毒,且价格相对便宜,受到了国内一部分老师和同学的青睐。
Goldview是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,Goldview与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外灯下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。
上样缓冲液的成分和作用
2.PCR产物与变性buffer混合。在干净的PCR管底部加入5ulSSCP上样缓冲液(变性缓冲液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。
3.PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95℃变性10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。
注:3和4步可以在制SSCP胶第四步后,等胶凝的过程中进行。
3.灌胶。配好胶后搅匀,灌入装好的玻璃板中,注意不能产生气泡,如果产生气泡把板立起,轻轻敲打可使气泡升出胶面,胶面与凹板上沿大约差0.5cm时插上梳子,要保证梳子齿和液面接触处没有气泡,上样缓冲液,一旦产生要拔出重插。


