老铁们，大家好，相信还有很多朋友对于细胞冻存液配方和细胞冻存液dmso比例的相关问题不太懂，没关系，今天就由我来为大家分享分享细胞冻存液配方以及细胞冻存液dmso比例的问题，文章篇幅可能偏长，希望可以帮助到大家，下面一起来看看吧！
本文主要内容一览
- 1、细胞冻存液有基础培养基和冷冻保护剂两者组成对吗
- 2、细胞冻存液可以冻细菌吗
- 3、冻存液的配制需要水浴加热吗
- 4、求细胞冻存液的主要作用及成分。越全越好。。
- 5、细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
- 6、细胞保存用液的制作
细胞冻存液配方（细胞冻存液dmso比例）
1细胞冻存液有基础培养基和冷冻保护剂两者组成对吗
细胞冻存液有基础培养基和冷冻保护剂两者组成对。根据查询相关资料显示：由血清，培养基，冷冻保护剂组成，冻存保护的DMSO组分，在进入细胞后结合细胞内部的水份，降低冰点，防止细胞在冷冻过程中形成冰晶对细胞造成损害。
细胞冻存液配方（细胞冻存液dmso比例）
2细胞冻存液可以冻细菌吗
可以。细胞冻存液配方成分明确，可以冻住不含动物来源性蛋白，不含血清，可减少各类细菌、病毒和支原体等污染，保证冻存细胞的安全，该冻存液含DMSO葡萄糖等各种。
3冻存液的配制需要水浴加热吗
不需要。1、配置含10%DMSO或凡士林、10～20%小牛血清的冻存细胞培养液。2、取对数成长期的体细胞，除去旧细胞培养液，用PBS清理。3、除去PBS，添加适量蛋白酶(遮盖细胞培养皿表层)把单面生长发育的体细胞消化吸收出来。4、抽滤1000rpm，5min。
4求细胞冻存液的主要作用及成分。越全越好。。
作用：可保护细胞免受溶液损伤和冰晶损伤。
渗透性冷冻保护剂：可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。
非渗透性冷冻保护剂：不能渗透到细胞内，一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。
冷冻保护剂同溶液中的水分子结合，发生水合作用，弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成，同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤。
渗透性冷冻保护剂的保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前，渗透到细胞内，在细胞内外产生一定的摩尔浓度，降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度，从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。细胞内水分也不会过分外渗，避免了细胞过分脱水皱缩。
扩展资料：
保护剂使用注意
1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液。
2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤。
3．冻存和复苏最好用新配制的培养液。
参考资料来源：百度百科——冻存保护剂
参考资料来源：百度百科——细胞冻存
5细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
一、细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。
加入10mlDMEM培养基清洗，弃上清液。加入10mlDMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。
二、细胞传代
细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1mlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。
加入10mlPBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10mlPBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。
三、细胞冻存
细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10mlPBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。
加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。
冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
注意事项
（1）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作：
①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。
②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。
③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。
④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。
⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。
⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。
⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。
（2）细胞污染的预防
①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。
②操作过程防止污染。
③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。
④实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。
⑤进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。
⑥细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。
⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的污染。
⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。
⑨不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。
⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。
（3）防止细胞交叉污染
①在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。
②在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。
③所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。
扩展资料：
细胞培养（cellculture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。
不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。
细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
参考资料：百度百科：细胞培养
6细胞保存用液的制作
细胞冻存剂DMSO是目前最好的细胞冻存保护剂，但又有一定的毒性。一般使用时浓度控制在终体积10%以下，对于耐受力弱的细胞可以再降低到10%以下，如8%。注意细胞复苏时要尽快洗掉二甲基亚砜，否则会造成细胞严重的毒性。研究结果表明，培养液中DMSO浓度为10%时，细胞生长抑制率近100%；1%浓度时抑制率为35%，即使是0.04%的浓度，DMSO对细胞的生长也有不利的影响[10]。
细胞给药时化合物的溶剂DMSO在细胞给药溶解化合物时应严格控制DMSO的使用剂量：不同细胞可能对DMSO含量的敏感程度不一样，但是现在比较能接受的是采用DMSO配制化合物进行细胞给药时，DMSO的终浓度控制在0.1%以内是被认为对细胞实验没有干扰的，即1ml培养基中，DMSO体积不能超过1μl。如果发现体积超过这个比例，我们可以通过提高药物浓度，或者采用水相多步稀释法来降低DMSO的使用量。
（摘）
