谷丙转氨酶（
ALT/GPT
）测试盒的注意点
谷丙转氨酶（谷丙转氨酶偏高说明什么原因）
（
微板法）
一、测定原理：
谷丙转氨酶（
ALT
）在
37
℃及
PH7.4
条件下，作用于丙
氨酸及
α-
酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应
30min
后（固定时间）加入
2,4-
二-硝-基-苯肼（
DNPH
）盐酸溶
液，既中止反应，同时
DNPH
与酮酸中羰基加成，生成丙酮
酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于
505nm
比读吸光度
并计算酶活力。
二、试剂的组成与配制：
(96T)
试剂一
:
谷丙转氨酶基质液
,5mL×1
瓶，
4
℃冰箱保存
6
个月；
试剂二
:
2,4—
二-硝-基-苯肼液
,5mL×1
瓶，
4
℃冰箱保存
6
个月；
试剂三
:
4mol/L
氢氧化钠液
,5mL×1
瓶，室温密封保存
6
个月；
0.4mol/L
氢氧化钠液
的配制
,
临用时按
4mol/L
氢氧化钠液
:
双
蒸水
=1
∶
9
的比例稀释，需多少配多少，室温密封保存。
试剂四
:
2
m
mol/mL
丙酮酸钠标准液
×1
支，
4
℃冰箱保存
6
个月；
试剂五
:
0.1mol/L
磷酸盐缓冲液
×1
支，
4
℃冰箱保存
6
个月。
三、操作过程：
1
、样本前处理
:
①、血清（浆）及其它液体样本待测：
直接测定。
②、动物组织样本：
准确称取组织重量，按重量（
g
）：体积
(mL)=1:9
的比例，加入
9
倍体积的生理盐水，冰水浴条件
下机械匀浆，
2500
转
/
分，离心
10
分钟，取上清液待测。
③、培养细胞样本前处理：
将收集好的细胞用等渗缓冲液（推
荐
0.1mol/LpH7
～
7.4
磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗
1
～
2
次；
1000
转
/
分
,
离心
10
分钟
,
弃上清
,
留细胞沉淀，加入匀
浆介质（推荐加入
0.1mol/LpH7
～
7.4
磷酸盐缓冲液或生
理盐水），冰水浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的
匀浆液不离心，待测。
2
、操作表
:
1
、
比色法中常用的有赖氏（
Reitman-Frankel
）法及金氏（
King
）
法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏分
光
光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报
告结果，比较准确。
卡门氏单位定义
：
1mL
液体，反应液总容量
3mL
，波长
340nm
，
1cm
光径，
25
℃，
1min
内所生成的丙酮酸，使
NADH
氧化
成
NAD
+
而引起吸光度每下降
0.001
为一个单位（
1
卡门氏
单位
=0.482U/L
，
25
℃）。
2
、
一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试
剂空白孔（以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作）。
所以，成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清
对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对脂血、黄疸或溶血血
清，每份标本应作对照孔。
3
、
酶活力超过
150
卡门氏单位时，用生理盐水稀释血清后重测。
4
、
应将一般血清的对照孔（或称标本空白孔）的吸光度作为日
常质控的指标之一；如相差大，可考虑
α-
酮戊二酸浓度、
DNPH
浓度及仪器等原因引起。
5
、
血清中
ALT
在室温（
25
℃）可保存
2
天，在
0
～
4
℃可保存一
周，在
-25
℃可保存
1
个月。
附录
Ⅰ：
ALT
标准曲线
1
、操作表
:
附录
Ⅱ：组织中
ALT
测定
1
、样本前处理：
准确称取组织重量
,
按重量
(g):
体积
(mL)=1:9
的比例
,
加入
9
倍体
积的生理盐水
,
冰水浴条件下机械匀浆
,
制成
10%
的组织匀浆
,2500
转
/
分
,
离心
10
分钟
,
取上清液
,
再用生理盐水稀释到适宜浓度
(
通过标
准曲线后计算得匀浆液卡门氏单位值小于
150)
待测。
(
取部分上清
液测蛋白浓度
,
蛋白定量试剂盒本所有售
)
2
、操作表：
组织中
活力
=
通过标准曲线得
¸
待测匀浆液蛋白
匀浆液
ALT活力浓度
附录
Ⅲ：血清（浆）中
ALT
测定
1
、前处理：
血清
(
浆
)
直接取样进行测定。（若酶活力超过
150
卡门氏单位
时，需用生理盐水稀释血清后重新测定）
2
、操作表：
谷丙转氨酶（
ALT/GPT
）测试盒的注意点
