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本文主要内容一览

乙酰丁香酮(甲基丁香酚)
1将基因导入红豆杉细胞的常用方法
(1)建立了一种以紫杉醇合成关键酶10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶(DBAT)和C-13苯丙氨基侧链CoA乙酰基转移酶(BAPT)基因为分子标记,基于PCR扩增技术高通量快速筛选产紫杉醇内生真菌的方法,极大地简化了筛选过程,提高了筛选效率,突破了传统筛选方法耗时费力却不易取得结果的不足。 (2)利用该方法筛选获得三株产紫杉醇较高的内生真菌MD2、MD3和YN6,并根据形态特征、生理生化特征以及18S rDNA序列分析等,分别鉴定为枝状枝孢霉、亮白曲霉和拟盘多毛孢属真菌,其中,枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3是该种内首次被作为产紫杉醇真菌报道的菌株。枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3和拟盘多毛孢YN6在300 ml PDL培养基中,25℃、180rpm摇瓶振荡发酵培养10天,紫杉醇产量分别为160μg/L,112μg/L和140μg/L,为目前紫杉醇产量较高的野生菌株。 (3)首次从产紫杉醇真菌枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3和拟盘多毛孢YN6中克隆了10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶全基因(dbat),DNA序列分析表明,它们和红豆杉的dbat基因有着很高的同源性。这也是首次关于产紫杉醇内生真菌的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-0-乙酰基转移酶基因的报道。 (4)对影响枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3合成紫杉醇的培养温度,发酵液初始pH、摇床转速等发酵条件进行了探讨,确定了较适发酵条件,并通过研究四种前体物对枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3合成紫杉醇的影响,初步优化了培养基。以优化后的发酵培养基发酵,枝状枝孢霉MD2和亮白曲霉MD3的紫杉醇产量分别提高到569.5μg/L和497.3μg/L,比原始条件下产量分别提高了356%和444%。 (5)采用根癌农杆菌LBA4404介导,以紫杉醇产生菌株枝状枝孢霉MD2分生孢子为受体材料,对影响转化效率的主要因素,如:农杆菌生长时期、初始菌液量、共培养温度和时间,以及乙酰丁香酮的添加阶段和剂量等因素进行了分析,确定了采用根癌农杆菌LBA4404介导转化枝状枝孢霉MD2的最适条件,建立了根癌农杆菌介导产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2的遗传转化体系。 (6)通过从曼地亚红豆杉细胞和长春花叶片中分别克隆dbat基因和orca3基因,以双元载体pCAMBIA1303为基本骨架,分别成功构建了包含紫杉醇合成关键酶基因dbat基因和来自长春花的转录调控因子orca3基因的一价、二价载体,转化曼地亚红豆杉细胞和枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3,获得了转化子。导入dbat基因的枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3转化子的紫杉醇产量提高至860μg/L和750μg/L,较野生菌株紫杉醇产量各提高了1.5倍。导入dbat基因的曼地亚红豆杉细胞转化子的紫杉醇产量提高至923.5μg/L,提高了1.3倍。导入dbat基因的枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3转化子的紫杉醇产量提高的结果,首次证明了dbat基因在这两株产紫杉醇内生真菌中是紫杉醇合成的关键酶基因。 (7)在红豆杉细胞和产紫杉醇内生真菌枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3中转化和表达orca3基因,发现该转录因子对紫杉醇合成的调控是负调控,导入orca3基因的枝状枝孢霉MD2、亮白曲霉MD3和曼地亚红豆杉细胞转化子的紫杉醇产量都有明显降低。 (8)通过随机引物PCR方法和单边特异引物结合的半巢式PCR扩增(hemi-nestedPCR amplification)方法,首次分离和克隆了dbat基因的5-侧翼序列,并在烟草叶片中进行了瞬时表达验证其启动子功能。进一步克隆并转化调控紫杉醇高产稳定合成的转录因子,构建诱导可控表达该转录因子的转基因红豆杉细胞系和产紫杉醇真菌。

乙酰丁香酮(甲基丁香酚)
2乙酰丁香酮配制方法
乙酰丁香酮的配制方法:
1、用于拟南芥花侵染的,配制使用的溶剂为DMSO,母液为100mM,使用浓度请参照相关文献。
2、另外一种是用于愈伤组织的侵染,是用少量甲醇溶解后,再用蒸馏水定容。之后过滤除菌。显然两者溶剂不一样,不过建议还是使用DMSO。
乙酰丁香酮(AS)的作用原理,是其可诱导农杆菌Vir基因活化,从而促进外源基因的整合。所以最好让其有一定的诱导时间再转化,效果要好些,而不是加完后直接转化(需要活化)。
扩展资料
要使化学反应能发生,首先反应物分子必须发生碰撞,并在碰撞中使反应物分子中的化学键断裂,同时形成新的化学键。因此两个相碰撞的分子必须具有足够大的能量,否则就不能使旧键断裂,新键形成,因而就不能发生化学反应。
例如对于反应:2HI—H2+I2,两个HI分子发生反应,总是首先发生碰撞,碰撞中两个HI分子中的H原子互相趋近,生成H2,这就要克服来自两方面的阻力:
①H一I键断裂需克服其键能阻力;
②两个H原子相互靠近结合具有一定的斥力,也需依靠一定的能量去克服。只有使两个HI分子碰撞时的能量大于以上需克服的阻力,反应才能发生。阿仑尼乌斯在对其经验公式的理论解释中,提出了活化能的概念,他指出:
为了能发生化学反应,普通分子(具有平均能量的分子)必须吸收足够能量先变成活化分子,在此变化过程中所要吸收的最小能量称为活化能Ea。化能的单位是J/mol。在一定温度下,活化能越大,反应就越慢。如图所示,对于一定的反应,活化能一定,若温度越高,反应就越快。
能引起化学反应的碰撞称为有效碰撞,发生有效碰撞时形成的中间活化物分子称为活化分子,活化分子的平均能量E’与反应物分子的平均能量E之差称为化学反应的活化能Ea。
参考资料来源:百度百科-活化
参考资料来源:百度百科-乙酰丁香酮
3AS是什么意思的缩写
相关意思:
AS:科学院(AcademyofScience)
AS:亚斯伯格症(AspergerSyndrome)
AS:乙酰丁香酮英文缩写
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AS:自治系统(AutonomousSystem)
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AS:Flash的动作脚本语言
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4植物组培实验室常用的培养基有哪几种类型
1、常用的培养基自1937年White建立第一个植物组织培养培养基以来,许多研究者报道了各种培养基,其数量很多,配方各异。根据营养水平不同,培养基可分为基本培养基和完全培养基。基本培养基也就是通常所说的培养基,主要有MS、White、B5、N6、改良MS、Nitsh、Miller、SH等,其配方见植物组织培养常用培养基配方表。完全培养基是在基本培养基的基础上,根据试验的不同需要,附加一些物质。如植物生长调节物质和其他复杂有机新增物等。2、几种常用基本培养基的特点(1)MS培养基1962年Murashige和Skoog为培养菸草组织时设计的,是目前应用最广泛的一种培养基。其特点是无机盐浓度高,具有高含量的氮、钾,尤其是铵盐和硝酸盐的含量很大,能够满足迅速增长的组织对营养元素的需求,有加速愈伤组织和培养物生长的作用,当培养物久不转移时仍可维持其生存。但它不适合生长缓慢、对无机盐浓度要求比较低的植物,尤其不适合铵盐过高易发生毒害的植物。与MS培养基基本成分较为接近的还有LS、RM培养基,LS培养基去掉了甘氨酸、盐酸吡哆醇和烟酸;RM培养基把硝酸铵的含量提高到4950mg/L,磷酸二氢钾提高到510mg/L。(2)White培养基1943年由White设计的,1963年做了改良。这是一个低盐浓度培养基,它的使用也很广泛,无论是对生根培养还是胚胎培养或一般组织培养都有很好的效果。(3)N6培养基1974年由我国朱至清等学者为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。其特点是KNO3和(NH4)2SO4含量高,不含钼。目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花粉和花药培养。(4)B5培养基1968年由Camborh等设计的。它的主要特点是含有较低的铵盐,较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。铵盐可能对不少培养物的生长有抑制作用,但它适合于某些双子叶植物特别是木本植物的生长。(5)SH培养基1972年由SchenkHid和Hidebrandt设计的。它的主要特点与B5相似,不用(NH4)2SO4,而改用NH4H2PO4,是无机盐浓度较高的培养基。在不少单子叶和双子叶植物上使用,效果很好。(6)Miller培养基与MS培养基比较,Miller培养基无机元素用量减少1/3~1/2,微量元素种类减少。无肌醇。(7)VW培养基1949年由Vacin和Went设计,适合于气生兰的培养。总的离子强度稍低些,磷以磷酸钙形式供给,要先用1mol/LHCl溶解后再加入混合溶液中。
一般大肠杆菌都使用LB培养基。LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
植物组培常用培养基如下MS(Murashige&Skoog)培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。B5培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好,而另一些植物,在B5培养基上更适宜。N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养。怀特(While)培养基由于无机盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。
植物组培可能都不一样,最好是说清楚是哪个植物。我是做水稻的。用的有诱导培养培养基(NBD)NB①+2,4-D2mg/L+Gelrite2.8g/L,pH5.8继代培养培养基(NBD)同诱导培养培养基共培养培养基I(NBCI)NB+2,4-D2mg/L+乙酰丁香酮(As)100μmol/L,pH5.5共培养培养基Ⅱ(NBCⅡ)NBCI+Gelrite2.8g/L,pH5.5选择培养基I(NBSI)NBD+头孢霉素500mg/L+潮霉素B50mg/L,pH5.8选择培养基Ⅱ(NBSⅡ)NBD+头孢霉素400mg/L+潮霉素B50mg/L,pH5.8分化培养基(RM)NB+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+KT4.0mg/L+头孢霉素300mg/L+潮霉素B50mg/L+Gelrite3.5g/L,pH5.8生根培养基(ShM)1/2NB无机盐+蔗糖15g/L+Agar7g/L,pH5.8其中①NB:N6大量+MS铁盐+B5微量+B5有机+水解酪蛋白0.5g/L+谷氨酰胺0.5g/L+脯氨酸0.5g/L+蔗糖30g/L
植物组织培养培养基的五类成分1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成,大量元素中,氮源通常有硝态氮或铵态氮,但在培养基中用硝态氮的较多,也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子,在近代的培养基中,其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物,由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子,大多以螯合铁的形式存在,即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。2.碳源培养的植物组织或细胞,它们的光合作用较弱。因此,需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起重要作用。3.维生素在培养基中加入维生素,常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素,其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。另外,琼脂也是最常用的有机附加物,它主要是作为培养基的支援物,使培养基呈固体状态,以利于各种外植体的培养。5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类:(1)植物生长素类。如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)。(2)细胞分裂素。如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。(3)赤霉素。组织培养中使用的赤霉素只有一种,即赤霉酸(GA3)。
这个现在很多植物都会用的,一般组培都用这个,只是比例不同而已,有可能用的是二分之一MS培养基。我们的拟南芥、菸草、牡丹用的都是MS培养基,针对不同的植物可以搜论文,看看他们采用的是哪一种组培培养基,培养基其实不是最关键的,最关键的是培养基里面激素的比例。
培养基种类繁多,根据其成分、物理状态和用途可将培养基分成多种型别。(一)按成分不同划分1、天然培养基(plexmedium)这类培养基含有化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物,也称非化学限定培养基(chemicallyundefinedmedium)。牛肉膏蛋白胨培养基和麦芽汁培养基就属于此类。基因克隆技术中常用的LB(Luria—Bertani)培养基也是一种天然培养基,其组成见表5.9。牛肉浸膏、蛋白胨及酵母浸膏的来源及主要成分营养物质牛肉浸膏来源瘦牛肉组织浸出汁浓缩而成的膏状物质主要成分富含水溶性糖类、有机氮化合物、维生素、盐等营养物质蛋白胨来源将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成主要成分富含有机氮化合物、也含有一些维生素和糖类的粉末状物质营养物质酵母浸膏来源酵母细胞的水溶性提取物浓缩而成的膏状物质主要成分富含B类维生素,也含有有机氮化合物和糖类常用的天然有机营养物质包括牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏(表5.10)、豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁、胡萝卜汁、椰子汁等,嗜粪微生物(coprophilousmicroani***s)可以利用粪水作为营养物质。天然培养基成本较低,除在实验室经常使用外,也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。2、合成培养基(synthicmedium)是由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基,也称化学限定培养基(chemicallydefinedmedium),高氏I号培养基和查氏培养基就属于此种类型。配制合成培养基时重复性强,但与天然培养基相比其成本较高,微生物在其中生长速度较慢,一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。(二)根据物理状态划分根据培养基中凝固剂的有无及含量的多少,可将培养基划分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基三种类型。1、固体培养基(so1idmedium)在液体培养基中加入一定量凝固剂,使其成为固体状态即为固体培养基。理想的凝固剂应具备以下条件:①不被所培养的微生物分解利用;②在微生物生长的温度范围内保持固体状态,在培养嗜热细菌时,由于高温容易引起培养基液化,通常在培养基中适当增加凝固剂来解决这一问题;③凝固剂凝固点温度不能太低,否则将不利于微生物的生长;④凝固剂对所培养的微生物无毒害作用;⑤凝固剂在灭菌过程中不会被破坏;⑥透明度好,粘着力强;⑦配制方便且价格低廉。常用的凝固剂有琼脂(agar)、明胶(gelatain)和矽胶(silicagel)。表5.11列出琼脂和明胶的一些主要特征。对绝大多数微生物而言,琼脂是最理想的凝固剂,琼脂是由藻类(海产石花菜)中提取的一种高度分支的复杂多糖;明胶是由胶原蛋白制备得到的产物,是最早用来作为凝固剂的物质,但由于其凝固点太低,而且某些细菌和许多真菌产生的非特异性胞外蛋白酶以及梭菌产生的特异性胶原酶都能液化明胶,目前已较少作为凝固剂;矽胶是由无机的矽酸钠(Na2SO3)及矽酸钾(K2SiO3)被盐酸及硫酸中和时凝聚而成的胶体,它不含有机物,适合配制分离与培养自养型微生物的培养基。
用葡萄糖、氯化钠配制的微生物培养基就是营养最全面的全营养培养基、牛肉浸粉(或浸膏)、蛋白胨,也可以加入琼脂制成固体或半固体培养基营养成分越全面。绝大多数细菌都可以在这种培养基中生长,能够生长的细菌也越多。可以是液体培养基
细菌一般采用牛肉膏蛋白胨培养基或LB培养基:牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏5g/L蛋白胨10g/L氯化钠5g/LpH7.0-7.2
LB培养基:酵母粉5g/L蛋白胨10g/L氯化钠10g/LpH7.0-7.2
PCA啊,平板计数琼脂培养基。我们培养细菌主要是从食品中拿出点作为样本,用培养基培养细菌从而反应食品污染及安全程度。


