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轮转式切片机(半自动切片机)
1超薄切片制样的缺点
超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜 观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片 。
在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
01取材基本要求
组织从生物活体取下以后,如果不立即进行适当处理,会由于细胞内部各种酶的作用,出现细胞自溶现象。此外,还可能由于污染,微生物在组织内繁殖使细胞的微细结构遭受破坏。因此,为了使细胞结构尽可能保持生前状态,必须做到快、小、准、冷:
(1).动作迅速,组织从活体取下后应在最短时间内 (争取在1分钟内) 投入2.5%戊二醛固定液。
(2).所取组织的体积要小,一般不超过1mm×1mm×1mm。也可将组织修成1mm×1mm×2mm大小长条形。因
为固定剂的渗透能力较弱,组织块如果太大,块的内部将不能得到良好的固定。
(3).机械损伤要小,解剖器械应锋利,操作宜轻,避免牵拉、挫伤与挤压。
(4).操作最好在低温(0℃~4℃)下进行,以降低酶的活性,防止细胞自溶。
(5).取材部位要准确。
02固定
固定的目的是尽可能使细胞中的各种细胞器以及大分子结构保持生活状态,并且牢固地固定在它们原来所在的位置上。固定的方法有物理的和化学的两大类。物理的方法系采用冰冻、干燥、微波等手段来保持细胞结构;化学的方法是用一定的化学试剂来固定细胞结构。现通常使用化学方法进行固定,有时用物理-化学双固定。
常用的固定剂
(1)四氧化锇 (osmium tetroxide,)是一种强氧化剂,与氮原子有较强的亲和力,因而对于细胞结构中的蛋白质成分有良好的固定作用。
(2)戊二醛 (glutaraldehyde C5H8O2), 戊二醛的优点是对糖原、糖蛋白、微管、内质网和细胞基质等有较好的固定作用,对组织和细胞的穿透力比四氧化锇强,还能保存某些酶的活力,长时间的固定(几周甚至1~2个月)不会使组织变脆。缺点是不能保存脂肪,没有电子染色作用,对细胞膜的显示较差。
(3)组织块固定常规采用戊二醛―锇酸双重固定法。分预固定和后固定,中间用磷酸缓冲液漂洗。前固定用2.5%戊二醛固定2小时以上、后固定用1%锇酸固定液固定1~2小时,pH7.2~7.4。固定完毕,用缓冲液漂洗30分钟后进行脱水。
03脱水
为了保证包埋介质完全渗入组织内部,必须事先将组织内的水分去除干净,即用一种和水及包埋剂均能相混溶的液体来取代水,常用的脱水剂是乙醇和丙酮。急骤的脱水会引起细胞的收缩,因此,脱水应梯度进行:70% 丙酮15分钟,80% 丙酮15分钟,90%丙酮15分钟,100%丙酮20分钟(分二次进行)。游离细胞可适当缩短脱水时间。过度脱水不仅引起更多物质的抽提,而且会使细胞皱缩变形、超微结构破坏、同时引起样品发脆,造成切片困难或无法切片。
04浸透和包埋
浸透就是利用包埋剂渗入到组织内部取代脱水剂,这种包埋剂在单体状态时(聚合前)为液体,能够渗入组织内,当加入某些催化剂,并经加温后,能聚合成固体,以便进行超薄切片。目前常用的包埋剂是环氧树脂(epoxy resin)。
05超薄切片前的准备工作
(1)修块
一般用手工对包埋块进行修整。将包埋块夹在特制的夹持器上,放在解剖显微镜下,用锋利的刀片先削去表面的包埋剂,露出组织,然后在组织的四周以和水平面成45度的角度削去包埋剂,修成锥体形。
(2)半薄切片定位
利用超薄切片机切厚度为1μm-5μm的切片,称半薄切片。将切下的片子用镊子或小毛刷转移到干净的事先滴有蒸馏水的载玻片上,加温,使切片展平,干燥后经甲苯胺蓝染色,光学显微镜观察定位。如果半薄切片做得好,比一般石蜡切片更能观察到细微结构,效果比石蜡切片要好一些。
半薄切片进行光学显微镜观察的目的:(a) 定位:通过光学显微镜观察,确定所要观察的范围,然后保留要用电镜观察的部分,修去其余部分。(b)便于对同一组织的同一部位进行光学显微镜和电镜的对比观察。半薄切片定位以后,要对包埋块作进一步的修整。通常将块的顶端修成金字塔形,顶面修成梯形或长方形(最好是梯形),每边的长度为0.2 mm~0.3 mm。
06超薄切片
超薄切片需用超薄切片机进行。根据推进原理不同,将超薄切片机分为两大类:一类是机械推进式切片机,用微动螺旋和微动杠杆来提供微小推进;另一类是热胀冷缩式切片机,利用金属杆热胀或冷缩时产生的微小长度变化来提供推进。
超薄切片的步骤包括:(1)安装包埋块;(2)安装玻璃刀;(3)调节刀与组织块的距离;(4)调节水槽液面高度与灯光位置;(5)调节加热电流及切片速度,切片;(6)将切片捞在有支持膜的载网上。
7.染色
常用的染色剂有醋酸铀和柠檬酸铅。染色方法有两种:
1.组织块染色
2.切片染色
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轮转式切片机(半自动切片机)
2羊肉切片机多少钱一台
羊肉切片机多少钱一台,一起来看看小编今天的分享吧。羊肉切片机的价位得看是小型的还是大型的,做什么使用,是火锅店使用还是搞羊肉卷加工,一般小型家用的有手工切片的不过几十块,电动的500-200元左右,如果是大型的一台机器的价格基本是在5000-20000元左右。羊肉片机器怎么选购如何选购羊肉片机器,让一些不了解机器的人非常为难。很多人认为包装好看的机器就是好机器,但是机器内部的零部件是很多人都不了解的。1、首先我们需要看机器的包装是否完整,注意标志是否完整,包装连接处是否平整。2、其次我们需要听机器运转的声音,听一下电机的声音是否正常,减速机的声音是否过大。还需要听一下机器本身的噪音,零部件的安装会非常精细,所以噪音并不会很大。机器内容润滑到位的话噪音也不会很大。3、最后我们还需要看一下机器运转时的效果和切片的质量。如果是正规厂家生产的机器,那么其切出的肉卷厚薄均匀,成型美观,反之则会出现不均匀的现象产生。以上就是小编今天的分享了,希望可以帮助到大家。
3石蜡切片制作中封片前的切片需要再次脱水吗
需要。\x0d\x0a切片一系列工作完成后,就要进行染色和封片了。由于要染色的切片尚包在石蜡中,而所用的染色液都为水溶液,因此在染色之前,必须再度复水。与固定的组织块脱水、透明的步骤相反,石蜡切片先在二甲苯中溶去石蜡,再经过各级酒精,下行至水。\x0d\x0a染色后,如果组织片中有水分,则光不宜通透,在显微镜下观察不清组织的结构,所以必须经过脱水。\x0d\x0a\x0d\x0a给你我们学校的实验讲义看看吧~希望对你有帮助~有不懂的地方问我~\x0d\x0a\x0d\x0a实验一 石蜡包埋切片技术\x0d\x0a\x0d\x0a实验目的:1、学习石蜡包埋切片技术的基本原理和基本步骤;\x0d\x0a\x0d\x0a2、掌握石蜡包埋切片技术。\x0d\x0a\x0d\x0a实验原理:\x0d\x0a\x0d\x0a大家在生物学实验时,曾经观察过动物组织和植物组织的切片。通过光学显微镜,我们可以观察到细胞内部的结构(例如细胞核、细胞质、肌肉组织的横纹等)、细胞相互间的联系以及组织的构成等。那么,如何来制作这种切片呢?其过程是比较复杂的,我们利用3—4次实验来学习组织切片的制作。\x0d\x0a\x0d\x0a大家知道,我们要在显微镜下研究生物体的内部结构,在自然状态下是无法观察的,因为整个动、植物体大部分都是不透明的,不能直接在显微镜下观察,一定要经过特殊的处理,使要观察的材料先减少它的厚度和体积,使光线能透过才能用显微镜观察。通常应用的有两种方法:一种是非切片法,即用物理或化学的方法将生物体组织分离成为单个细胞或薄片,例如我们在生物学实验曾做过口腔上皮的观察、洋葱鳞茎表皮的观察。这种方法的不足之处在于细胞彼此间相互的联系不一定观察到。另外一种为切片法,即用刀将标本切成薄片。\x0d\x0a\x0d\x0a非切片法比较简单,一学就会,我们这里不作介绍。\x0d\x0a\x0d\x0a切片法也分徒手切片法和切片机切片法。最简单的切片法是将新鲜植物材料直接用刀切成薄片,称之为徒手切片法。切片机切片法是用特殊的切片机来切片,切片的厚度可薄到几个微米。因此,切片机的发明与应用也是细胞学诞生的重要因素。\x0d\x0a\x0d\x0a切片机切组织用的也是刀(切片刀),所要切的组织要有一定的软硬度,如刀切肉(新鲜、冷冻)。但大部分生物材料比较柔软,所以为了能切出薄片,必须先使所切材料有一定的软硬度。一些包埋剂可以达到这个目的,如石蜡,它融化时可渗入到组织内部;凝固时,使整个组织有一定的软硬度,正好能切出很薄的切片,故称为石蜡包埋切片法。另外还有火棉胶包埋切片法(火棉胶做包埋剂)、冰冻切片法(使组织冷冻到一定的硬度)等。其中最常用的切片方法还是石蜡包埋切片法,我们这里重点学习石蜡包埋切片技术。\x0d\x0a\x0d\x0a实验器材:\x0d\x0a\x0d\x0a(一)小鼠、小广口瓶、标签、量筒、烧杯、95%酒精、无水酒精、蒸馏水、手术刀、剪刀、镊子、平皿、石蜡块、滤纸、甲醛液、苦味酸、冰醋酸、移液管、洗耳球。\x0d\x0a\x0d\x0a(二)恒温箱、融蜡、纸盒、烫板、支架、酒精灯、火柴、小镊子、滤纸。(擦载玻片、磨刀、液体石蜡)。\x0d\x0a\x0d\x0a(三)手术刀、木板、酒精灯、火柴、锯条、木块、塑料板、切片刀、切片机、毛笔、小镊子、载玻片、蛋白甘油、恒温水浴箱、温度计、大白盘。\x0d\x0a\x0d\x0a实验步骤:\x0d\x0a\x0d\x0a制作小鼠肝、脾、肾、小肠等切片。\x0d\x0a\x0d\x0a1、取材:取材是指从动物或植物体上割取所要观察的组织材料,比如植物的茎、叶,动物的肝脏、小肠等。\x0d\x0a\x0d\x0a取材时应注意以下几点:\x0d\x0a\x0d\x0a(1)新鲜:在割取材料时应愈快愈好,否则动植物体的细胞成分、结构及分布等就会发生改变。\x0d\x0a\x0d\x0a(2)防止人为损伤:如生拉硬拽、挤压等,以免出现人为损伤。\x0d\x0a\x0d\x0a(3)大小:0.5 cm × 0.5 cm × 0.2cm。\x0d\x0a\x0d\x0a2、固定:机体死亡或组织离体后,组织细胞由于血液供应停止,即可发生缺氧,导致生物氧化过程停止。相反,细胞内的无氧酵解酶类活跃,使组织内蛋白质、糖、脂肪降解,导致组织发生自溶。另外,组织也可因污染细菌而发生腐败。因此,为了使细胞和组织结构保持生活时的状态,必须进行适当的固定。固定的目的在于保存组织内细胞的形态、结构及其组成,使其与生活时相似。\x0d\x0a\x0d\x0a固定组织的物质——固定剂——具有凝固或沉淀组织蛋白的作用,因此能抑制酵解酶类的活动和细菌的繁殖,从而呈现对组织的固定作用。\x0d\x0a\x0d\x0a固定剂的种类很多,最常见的有乙醇、甲醛、冰醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞和锇酸等8种。各种固定剂对蛋白质、脂肪、糖等作用不同,因此,单一的固定剂不能保存所有的成分,故多用混合固定剂。\x0d\x0a\x0d\x0a各种书籍对固定剂的介绍特别多,如化学性质、固定的原理、固定组织的优缺点等,由于时间的所限,我们这里不作详细介绍,仅介绍几种常见的固定液及其配方和用途。\x0d\x0a\x0d\x0a(1)10%福尔马林液:1份甲醛液 + 9份蒸馏水\x0d\x0a\x0d\x0a市场上出售的甲醛液约含37-40%的甲醛,10%福尔马林液实际上仅含3.7-4.0%的甲醛。\x0d\x0a\x0d\x0a适用范围:各种组织。但是经10%福尔马林液固定的组织,细胞核染色较好,而细胞质染色较差。\x0d\x0a\x0d\x0a处理:组织块一般固定16-24h,长时间亦可,甚至可用来长期保存组织块。短时间固定的组织块不需水洗,可直接转入70%酒精脱水。\x0d\x0a\x0d\x0a(2)Bouin氏液:苦味酸饱和水溶液(1.22%) 75ml (15)\x0d\x0a\x0d\x0a甲醛液 25ml (5)\x0d\x0a\x0d\x0a冰醋酸 5ml (1)\x0d\x0a\x0d\x0a适用范围:各种动物组织及植物组织的根尖,是动物组织良好的固定液。\x0d\x0a\x0d\x0a处理:固定24h,也可在此液长期保存。流水冲洗或不经水洗直接入70%酒精脱水。\x0d\x0a\x0d\x0a(3)Zenker氏液: 甲液:氯化汞(升汞) 5g\x0d\x0a\x0d\x0a重铬酸钾 2.5g\x0d\x0a\x0d\x0a硫酸钠 1g\x0d\x0a\x0d\x0a蒸馏水 100ml\x0d\x0a\x0d\x0a乙液:冰醋酸 5ml\x0d\x0a\x0d\x0a使用前将甲、乙两液混合。\x0d\x0a\x0d\x0a适用范围:为一般动物组织的优良固定液,经其固定的组织,细胞核及细胞质染色颇为清晰。\x0d\x0a\x0d\x0a处理:固定时间为16-24h,然后流水冲洗一夜以洗去氯化汞,再入70%酒精脱水。切片染色前要用碘液除去汞沉淀。\x0d\x0a\x0d\x0a(4)Gendre氏液: 苦味酸饱和酒精液(8.96g/100ml95%酒精) 85ml\x0d\x0a\x0d\x0a甲醛液 10ml\x0d\x0a\x0d\x0a冰醋酸 5ml\x0d\x0a\x0d\x0a适用范围:用于检查动物组织中的糖原(因为糖原溶于水)。\x0d\x0a\x0d\x0a处理:固定3-6h,直接转入95%酒精脱水。\x0d\x0a\x0d\x0a(5)Carnoy氏液: 无水乙醇 60ml\x0d\x0a\x0d\x0a三氯甲烷 30ml\x0d\x0a\x0d\x0a冰醋酸 10ml\x0d\x0a\x0d\x0a适用范围:用于检查动物组织的核酸、糖原等。\x0d\x0a\x0d\x0a处理:固定2-6h,直接转入95%酒精脱水。\x0d\x0a\x0d\x0a还有多种多样的其它固定液。固定液的选择应根据所要固定的材料以及检查的目的而定。\x0d\x0a\x0d\x0a3、冲洗:材料自固定液中取出后,需立即冲洗,使其中所有的固定液全部除去,以妨碍染色。\x0d\x0a\x0d\x0a有些固定液,如10%福尔马林液、Bouin氏液固定的材料,若时间较短的话可不必冲洗。但时间过长亦需冲洗。\x0d\x0a\x0d\x0a冲洗的方法:组织块放在瓶内,胶管插入瓶内接通自来水,瓶口用纱布包住。流水冲洗一夜,即能达到冲洗的目的。\x0d\x0a\x0d\x0a4、脱水:脱水的目的在于使组织中的水分完全除去。因为组织块将来要在石蜡\x0d\x0a\x0d\x0a中包埋,而水和石蜡是不相溶的。必须经过脱水后,才能进入包埋阶段。\x0d\x0a\x0d\x0a常用的脱水剂有乙醇、丙酮、正丁醇等,最常用的还是乙醇。利用脱水剂吸水的特性,在各级浓度脱水剂中逐渐吸取组织中的水分。乙醇脱水的过程一般从70%乙醇开始,经80%、90%、95%、100%(二次)而完成脱水过程。每向后转移前,须先将组织块上的液体用吸水纸吸干,以免影响后续乙醇的浓度。\x0d\x0a\x0d\x0a脱水时应注意:(1)在高浓度或无水乙醇中,每级停留的时间不宜太长,否则可使组织收缩变脆,影响切片;(2)如需过夜,应停留在70%乙醇中,也可长期保存,可防止因时间倒不开而影响后续步骤。\x0d\x0a\x0d\x0a5、透明:脱水后是否可以进入包埋呢?但因脱水剂与石蜡也不相溶,因此在包\x0d\x0a\x0d\x0a埋前,需要一种既能溶于脱水剂又能溶于石蜡的物质——透明剂——来起中间置\x0d\x0a\x0d\x0a换作用。\x0d\x0a\x0d\x0a所以,透明的目的在于使组织中的乙醇或丙酮被透明剂所代替,以使石蜡能很顺利地进入组织中。另外,还能增强组织的折光系数,故称透明剂。\x0d\x0a\x0d\x0a透明剂的种类很多,常用的有二甲苯、甲苯、苯等。二甲苯为最常用的透明剂,二甲苯能溶于醇及醚,亦为石蜡溶剂,但不溶于水,它的透明力很强。\x0d\x0a\x0d\x0a透明过程:一般经过1/2二甲苯-1/2无水乙醇,两次二甲苯。\x0d\x0a\x0d\x0a透明彻底的标准:胃、肠、结缔组织等比较透明;肝、肾、心、肌肉等组织呈暗红色浸油状态,则说明脱水、透明良好。如果组织进入二甲苯30min以后还不变色,或中心有白色,说明水分未脱净,应返回无水乙醇继续脱水。透明这一步至关重要,若透明时间不足,则石蜡进不去,不能切片;若透明时间过长,则使组织收缩变脆、变硬,切片易碎。这一步要靠经验。\x0d\x0a\x0d\x0a6、浸蜡:浸蜡就是将石蜡透入整个组织的过程。\x0d\x0a\x0d\x0a所谓石蜡包埋切片法,是用石蜡来浸透、包埋组织块,再进行切片和染色的\x0d\x0a\x0d\x0a制片方法。\x0d\x0a\x0d\x0a石蜡为最常用的包埋剂,有几种不同熔点的石蜡,通常所用的石蜡的熔点为54-58℃。\x0d\x0a\x0d\x0a浸蜡过程:在60℃的温箱内已融化的石蜡中经两次各1h,使石蜡浸透组织。\x0d\x0a\x0d\x0a浸蜡时注意温度不宜过高,浸蜡时间亦不宜过长,否则会引起组织变硬、变脆,影响切片。\x0d\x0a\x0d\x0a7、包埋:包埋就是被石蜡浸透的组织连同溶化的石蜡,一起倒入一定形状的器皿(如纸盒、平皿)中,然后使其凝固成蜡块的过程。\x0d\x0a\x0d\x0a包埋的过程:(1)折叠纸盒;\x0d\x0a\x0d\x0a(2)用酒精灯加热温台及纸盒;\x0d\x0a\x0d\x0a(3)往纸盒中倒入溶化的石蜡;\x0d\x0a\x0d\x0a(4)放入组织块,切面向下,并拨正位置;\x0d\x0a\x0d\x0a(5)蜡块凝固。\x0d\x0a\x0d\x0a从取材到包埋是一个连续的过程,往往连续几天,如果没有计划、没有完善的安排,就有可能和其他上课时间发生冲突,或造成半夜出勤。有时单凭记忆,把前后顺序颠倒或超过了规定时间,会造成实验失败。因此需预先编制一个日程表。\x0d\x0a【建议时间】\x0d\x0a乙醇脱水:70%:16:30\x0d\x0a 80%:第二天7:20\x0d\x0a 90%:9:20\x0d\x0a 95%:11:00\x0d\x0a 100%(Ⅰ):12:00\x0d\x0a 100%(Ⅱ):13:00\x0d\x0a透明:1/2二甲苯-1/2无水乙醇:14:00\x0d\x0a 二甲苯(Ⅰ):14:20\x0d\x0a 二甲苯(Ⅱ):14:40\x0d\x0a浸蜡:石蜡(Ⅰ):15:00\x0d\x0a 石蜡(Ⅱ):16:00\x0d\x0a包埋:17:00\x0d\x0a\x0d\x0a注意事项:(1)动作要迅速;(2)融蜡别滴到桌面、地上。\x0d\x0a\x0d\x0a8、切片:在包埋后,就可以进行切片。在切片之前,还需对包埋好的组织块进行修整,并贴附于木块上,才能进行切片。\x0d\x0a\x0d\x0a修块:以每一组织块为单位,用小刀将组织块大体修成长方形或梯形,组织的周围须留1-2mm宽的蜡边。\x0d\x0a\x0d\x0a固着:用酒精灯烧热金属片,将组织块切面的对立面稍烫熔一下,并立即贴于木块上。\x0d\x0a\x0d\x0a切片机的构造:\x0d\x0a\x0d\x0a切片机是用来做各种组织切片的一种仪器,其样式很多,性能也不一样,一般可分为两大类型,即滑行式切片机与旋转式切片机。我们使用的是旋转式切片机。其主要结构分为3部分:(1)控制切片厚度的微动装置;(2)供装置切片刀的夹刀部分;(3)供装置组织块的夹物部分。旋转轮每旋转一次,微动装置就按所调节好的切片厚度以水平方向将组织块向前推进一片的厚度。\x0d\x0a\x0d\x0a切片操作:\x0d\x0a\x0d\x0a(1)固定切片刀:刀刃向上,保持水平。调好角度,一般在4-6度。\x0d\x0a\x0d\x0a(2)固定组织块。\x0d\x0a\x0d\x0a(3)调整所需要的切片厚度:一般在6-10微米。\x0d\x0a\x0d\x0a(4)移动持刀器,或拔开齿轮上的牵引钩,前后转动齿轮以移动组织块固定器,调节组织块表面和刀刃的距离,以刚要接近时为止。\x0d\x0a\x0d\x0a(5)调整组织块与刀刃之间的角度和位置:组织块的切面及上下边须与刀刃平行。\x0d\x0a\x0d\x0a(6)粗切:右手摇轮,左手转动齿轮,慢慢将组织块切到组织本身。\x0d\x0a\x0d\x0a(7)切片:右手转动摇轮,转一圈可切下一片,切第二片与第一片连在一起,即成连续切片。左手用镊子或毛笔提起切片的下端,轻轻向自身方向拽,使切片成连续的带状。\x0d\x0a\x0d\x0a(8)展片:停止切片,右手用另一支毛笔轻轻将蜡带跳起,靠刀刃的一面向下,慢慢接触40-45℃的水面,借助水的表面张力使其在水面展开。如有小的皱褶,用小镊子轻轻分开。应注意:水温过高,易使切片全部融化;水温过低,切片不宜伸展。\x0d\x0a\x0d\x0a(9)贴片:即将切片贴在载玻片上。先将连续切片分成一片或小段。将载玻片1/2处均匀涂一层薄薄的蛋白甘油(等量的鸡蛋清和甘油混合而成,防止脱片。切勿涂得过多!),将载玻片垂直插入水中,以涂有蛋白甘油的面贴近组织片,提起载玻片使组织片贴附在载玻片上。用小镊子将切片摆在载玻片1/3和2/3的交界处,并摆正位置。然后在52-60℃恒温箱烤干。\x0d\x0a\x0d\x0a整个石蜡包埋切片技术至此全部结束。\x0d\x0a\x0d\x0a实验二 苏木精-伊红染色\x0d\x0a\x0d\x0a实验目的:1、了解染色的基本原理和基本方法;\x0d\x0a\x0d\x0a2、掌握苏木精-伊红染色方法。\x0d\x0a\x0d\x0a实验原理:\x0d\x0a\x0d\x0a一、染料的一般知识\x0d\x0a\x0d\x0a1、染料的染色原理:(1)化学作用:染料的性质有酸、碱、中性之别,那么组织中的碱性部分(如细胞质)易和酸性染料亲和而发生作用,组织中的酸性部分(如染色质)易和碱性染料亲和而发生作用。(2)物理作用:指吸附或溶解作用。组织蛋白和某些染料有相互吸附的作用。\x0d\x0a\x0d\x0a2、媒染剂、促染剂和分化剂\x0d\x0a\x0d\x0a媒染剂:某些天然染料(如苏木精),本身无着色性,要与其他物质结合后才具有着色性,这些被结合的物质称为媒染剂,如许多铁盐、铬盐及钾盐等。\x0d\x0a\x0d\x0a促染剂:是促进染料着色性的物质,如冰醋酸是伊红的促染剂。\x0d\x0a\x0d\x0a分化剂:能使切片上需要显示的结构清晰,而使不需要显示的结构脱去颜色的物质。如1%盐酸酒精。\x0d\x0a\x0d\x0a一、苏木精-伊红染色(H.E染色)\x0d\x0a\x0d\x0a所做出的石蜡包埋切片可应用的染色方法很多,应根据不同的检查目的而选用不同的染色方法。而最为常用的染色法为H.E染色。\x0d\x0a\x0d\x0a1、苏木精(苏木素、苏木紫)(hematoxylin):为从苏木中提取。苏木精本身不是染料,不能直接染色,必须经氧化才能染色。可以在空气中自然氧化,但需时很长,所以一般都是加氧化剂(如碘酸钠)氧化。同时,被染材料又须经媒染剂作用后才有着色能力,所以在配制苏木精染液时,都加有媒染剂。苏木精液主要着染细胞核。\x0d\x0a\x0d\x0a有数种不同配方的苏木精液。\x0d\x0a\x0d\x0aMayer(梅耶)氏苏木精液:\x0d\x0a\x0d\x0a苏木素 1g\x0d\x0a\x0d\x0a硫酸铝钾 50g (媒染剂)\x0d\x0a\x0d\x0a碘酸钠 0.2g\x0d\x0a\x0d\x0a水合氯醛 50g\x0d\x0a\x0d\x0a柠檬酸 1g\x0d\x0a\x0d\x0a蒸馏水 1000ml\x0d\x0a\x0d\x0a2、伊红(曙红)(eosin):又分几种,如伊红Y、伊红B等。\x0d\x0a\x0d\x0a伊红对细胞质、肌纤维、胶原纤维具有着色性。\x0d\x0a\x0d\x0a一般用0.5%伊红/70%乙醇液或1%伊红水溶液。\x0d\x0a\x0d\x0a由于苏木精着染细胞核,伊红着染细胞质,所以这种方法称为双重对比染色法。\x0d\x0a\x0d\x0a实验材料:石蜡切片、盖玻片、小镊子、大镊子、树胶、滤纸、纱布、染色缸、二甲苯、乙醇系列、Mayer氏苏木精液、0.5%伊红酒精液(或1%伊红水溶液)、1%盐酸酒精、蒸馏水、显微镜。\x0d\x0a\x0d\x0a实验步骤:\x0d\x0a\x0d\x0a1、切片脱蜡、复水:\x0d\x0a\x0d\x0a由于要染色的切片尚包在石蜡之中,而所用的染色液都为水溶液,因此在染色之前,必须再度复水。与固定的组织块脱水、透明的步骤相反,石蜡切片先在二甲苯中溶去石蜡,再经过各级酒精,下行至水。\x0d\x0a\x0d\x0a把玻片放入盛有二甲苯的染色缸中以溶去石蜡(20min),再经第二缸二甲苯(10min)。经100%、95%、90%、80%、70%各级酒精、蒸馏水入水,每级3-5min。\x0d\x0a\x0d\x0a2、入苏木精液染5-7min。\x0d\x0a\x0d\x0a3、流水洗去附着染液,(在1%盐酸酒精中蘸3-4下),然后流水冲洗20min使切片由淡红色变为灰兰色。\x0d\x0a\x0d\x0a4、入伊红染液5-7min。\x0d\x0a\x0d\x0a5、脱水、透明:\x0d\x0a\x0d\x0a如果组织片中有水分,则光不宜通透,在显微镜下观察不清组织的结构,所以必须经过脱水。透明剂能增强组织的折光系数。这样,才能在显微镜下观察。\x0d\x0a\x0d\x0a在70%、80%、90%的酒精中每级各蘸3—4下,再经95%、100%Ⅰ、100%Ⅱ梯度酒精,每级各5min。在二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中分别透明10min。\x0d\x0a\x0d\x0a6、封片:\x0d\x0a\x0d\x0a从二甲苯中取出载玻片,未等二甲苯挥发,在组织切片上滴加适量树胶,上面再加盖玻片(倾斜放下)封固。\x0d\x0a\x0d\x0a封片目的:(1)便于保存;(2)应用合适折光率的封藏剂使组织结构能在镜下很清晰地显示出来。\x0d\x0a\x0d\x0a结果:细胞核呈蓝色至深蓝色,细胞质呈淡红色或红色。\x0d\x0a\x0d\x0a作业:1、为什么生物体的组织要经过如此繁琐的步骤才能观察其组织结构?\x0d\x0a\x0d\x0a2、查阅文献,有哪些文章采用石蜡包埋切片和H.E.染色?\x0d\x0a\x0d\x0a3、通过查阅文献,谈一下石蜡包埋切片和H.E.染色的用途。
4羊肉切片机的使用注意事项
一、肉类食品须冰冻硬化适中,一般在“-6℃”以上,且不宜过冻,肉如太硬应先解冻,肉内不可含有骨头,以免损坏刀片;并用压肉板压紧。调节厚度旋扭,设定所需的厚度。
二、羊肉切片机属于是食品切片机,适合切无骨肉类和其它类似榨菜带有弹性的食物,把原材料肉切成肉片等,肉片厚薄的调节是在刀片后面增减垫片调节的。使用之前请在滑动槽内滴些食用油减少摩擦力。
扩展资料:
工作原理
不同的切片机切片的方法也不同,比如试验中要处理细胞或者组织,从而方便用显微镜进行观察实验。用于光学显微镜的有旋转式和滑走式切片机,用于电子显微镜的有超薄切片机,使用玻璃刀或钻石刀制作超薄切片。
在造纸行业也需要用到切片机,适用刀盘式切片机,鼓式切片机,螺旋切片机等。刀盘式切片机由刀盘、机壳、喂料槽以及传动装置等部分组成,工作原理是利用沉重的刀盘起到飞轮的作用,稳定切片。
参考资料来源:百度百科—羊肉切片机


