本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
人
（
人多聚组氨酸标签（聚l组氨酸）
Human
）
多聚组氨酸标签（
HIS-Tag）
ELISA检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（
ELISA）。往预先包被
多聚组氨酸标签（
HIS-Tag）
抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、
HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的
多聚组氨酸标签（
HIS-Tag）
呈正相关。用酶标仪在
450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.
酶标仪（
450nm）
2.
高精度加样器及枪头：
0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.
37℃恒温箱
操作注意事项
1.
试剂盒保存在
2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.
浓度为
0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度
。
4.
严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.
所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称
96孔配置
48孔配置
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
标准品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
无
样本稀释液
6
mL
3
mL
无
检测抗体
-HRP
10mL
5mL
无
20×洗涤缓冲液
25mL
15mL
按说明书进行稀释
底物
A
6mL
3mL
无
底物
B
6mL
3mL
无
终止液
6mL
3mL
无
封板膜
2张
2张
无
说明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
注：标准品（
S0-S5）浓度
依次
为：
0、37.5、75、150、300、600μg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.
手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置
1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.
自动洗板机：每孔注入洗液
350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1.
从室温平衡
20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.
设置标准品孔和样本孔
，标准品孔各加不同浓度的标准品
50μL；
3.
样本孔先加
待测样本
10μL，再
加样本稀释液
4
0μL；
空白孔不加。
4.
除空白孔外，
标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（
HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.
弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置
1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.
每孔加入底物
A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.
每孔加入终止液
50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在
Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1.
准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数
R值，大于等于0.9900。
2.
灵敏度：最DI检测浓度小于
5.0μg/mL
。
3.
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.
重复性：板内、板间变异系数均小于
15%。
5.
贮藏：
2-8℃，避光防潮保存。
6.
有效期：
6个月
从
2011年开始
我们
致力
于在生命科学领域
、
生物医学实验
技术
及论文润色服务，协助客户各类实验服务及论文润色
十余年
，是您值得信赖的科研合作伙伴
!
如果您受时间、试验条件等限制而无法完成您的课题研究，欢迎您与我们联系。
实验技术服务：
ELISA
试剂盒免费代检测
CCK8检测
HE染色
PAS糖原染色
WesternBlot
免疫组化
染色
荧光定量
PCR
阿利新蓝染色
流式细胞检测
免疫荧光染色
激光共聚焦
动物
模型服务
石蜡
冰冻切片
透射电镜服务
扫描电镜实验
蛋白双向
蛋白双向
免疫共沉淀
原位杂交（
）
蛋白质纯化
探针合成
DNA甲基化实验
琼脂糖凝胶电泳
药理毒理动物实验
番红
固绿染色
明胶酶谱
酶活性检测
动物造模
模型实验服务
